共載阿霉素和EGFR siRNA的PLGA腦靶向納米粒的制備及抗神經膠質瘤作用研究.pdf

1、藥物的聯(lián)合治療是腫瘤治療的新策略之一。阿霉素是一種傳統(tǒng)的腫瘤化療藥物，但同時也是P-糖蛋白(P-gp)的底物，由于腦毛細血管內皮細胞表面也存在P-gp，非常不利于阿霉素穿過血腦屏障治療腦腫瘤。基因治療是一種比較有希望的治療手段。腦癌，肺癌，乳腺癌，頭頸癌，肝癌等都過度表達表皮生長因子受體(Epidermal growth factor receptor,EGFR)。腫瘤EGFR的表達水平與腫瘤的等級程度，不良的預后和對放療化療的抗性等都

2、有著密切的關系。本課題構建了一種共載阿霉素和EGFR siRNA的靶向納米粒遞送系統(tǒng)，以期能夠更好的治療神經膠質瘤。課題的主要內容如下:
　　1.ANG-CHI的合成與表征。通過3-馬來酰亞胺丙酸-N-羥基琥珀酸亞胺酯(Pr-NHS-Mal)，將靶向基團（angiopep-2）接載于殼聚糖上。采用傅里葉紅外光譜(FT-IR)、核磁共振(NMR)和BCA蛋白測定法分別對聚合物上的angiopep-2進行定性和定量表征，結果證實，an

3、giopep-2成功接載于殼聚糖上。
　　2.ANG/PLGA/DOX/siRNA靶向載藥系統(tǒng)的構建。通過單因素考察，確定納米粒制備處方，制備了ANG/PLGA/DOX納米粒載藥系統(tǒng)，并利用投射電鏡(TEM)，納米粒度和電位測定儀、紫外可見分光光度計對納米粒的形態(tài)、粒徑、電位、載藥量、包封率、體外釋放特征進行了表征。然后將其與荷負電荷的EGFR siRNA孵育，得到ANG/PLGA/DOX/siRNA靶向載藥系統(tǒng)，瓊脂糖凝膠電泳顯

4、示EGFR siRNA能夠很好的荷載于納米粒上。
　　3.ANG/PLGA/DOX/siRNA靶向載藥系統(tǒng)對人腦星形膠質母細胞瘤U87MG細胞的抗腫瘤活性。使用苯磺羅丹明B（SRB）法考察了空白載體以及各種載藥系統(tǒng)對U87MG細胞存活率的影響;使用激光共聚焦顯微鏡和流式細胞儀考察了載藥系統(tǒng)被U87細胞攝取情況，通過流式細胞儀分析載藥系統(tǒng)對細胞周期和細胞凋亡的影響。結果顯示，共載系統(tǒng)比單獨載藥系統(tǒng)的抗腫瘤活性更為顯著，作用4h后阿霉

5、素和siRNA能夠有效的被U87MG細胞同時攝取，引起細胞凋亡。
　　4.ANG/PLGA/DOX載藥系統(tǒng)小鼠體內藥物動力學和組織分布研究以及載藥系統(tǒng)透過血腦屏障能力研究。體內藥物動力學和組織分布研究顯示，載藥系統(tǒng)能夠提高阿霉素的藥時曲線下面積(AUC)，能夠有效的遞送藥物進入腦部。
　　本研究主要是制備了一種共載阿霉素和EGFR siRNA的靶向納米粒遞送系統(tǒng)，并通過一系列實驗指標考察了制劑的特征以及體外抗腫瘤活性，最后考