乳酸克魯維酵母Cu，Zn-SOD基因在釀酒酵母中的表達(dá).pdf

1、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase； EC1.15.1.1；SOD)廣泛存在于生物體內(nèi)。按金屬輔基的不同可分為Cu，Zn-SOD，Mn-SOD與Fe-SOD。Cu，Zn-SOD主要存在于真核生物的細(xì)胞質(zhì)和過(guò)氧化物酶中，同時(shí)它也存在于植物的葉綠體中。在哺乳動(dòng)物體內(nèi)存在兩種類型的Cu，Zn-SOD，一種是細(xì)胞內(nèi)存在形式，叫細(xì)胞內(nèi)Cu，Zn-SOD(簡(jiǎn)稱Cu，Zn-SOD)，另一種是細(xì)胞外存在形式，叫細(xì)胞外Cu，Zn-S

2、OD(簡(jiǎn)稱EC-SOD)。SOD是機(jī)體內(nèi)唯一以超氧陰離子自由基(O2-·)為底物的酶，它能專一地催化O2-·的歧化反應(yīng)，生成過(guò)氧化氫和氧氣，在防止氧化脅迫方面發(fā)揮重要作用，能有效的抵御氧自由基和其他氧化物，對(duì)機(jī)體防御氧化損傷起著十分重要的作用。 本工作主要對(duì)SOD在抵抗外界脅迫下功能進(jìn)行研究。通過(guò)PCR擴(kuò)增技術(shù)從乳酸克魯維酵母基因組中得到了465bp的Cu，Zn-SOD結(jié)構(gòu)基因，從pUCm-T載體上獲得了1214bp帶有PGK1

3、啟動(dòng)子和AT終止子的GFP基因，并把它們構(gòu)建到釀酒酵母表達(dá)載體YEplac195-PSGA中。通過(guò)菌落PCR驗(yàn)證和熒光檢測(cè)證明了所構(gòu)建載體能在釀酒酵母中成功表達(dá)；通過(guò)百草枯壓力篩選和鄰苯三酚酶活測(cè)定法證明了乳酸克魯維酵母SOD基因已經(jīng)在釀酒酵母中表達(dá)并且提高了釀酒酵母在氧化脅迫方面的耐受力；也證明提高SOD的表達(dá)量只能在一定范圍內(nèi)增加菌體在氧脅迫方面的耐受力。 通過(guò)Sph I/EcoR I雙酶切YEplac195-PSGA得到了