蚓激酶基因在畢赤酵母中的表達.pdf

1、蚓激酶(Lumbrokinase，LK)是從蚯蚓體內提取的一種具有纖溶活性的蛋白水解酶，它能直接降解血中纖維蛋白原及激活纖溶酶原為纖溶酶。蚓激酶能降低血液粘稠度、溶栓、減少血小板聚集、改善微循環(huán)，具有良好的體內外溶栓抗凝作用。作為溶栓藥物，蚓激酶先后在韓國和中國上市，在心腦血管疾病治療中顯示出明顯的療效。 畢赤酵母是目前應用最為廣泛和成功的外源蛋白表達系統(tǒng)，其培養(yǎng)條件簡單易行、容易形成大規(guī)模生產；表達產物經(jīng)過二硫鍵形成、正確折疊

2、、糖基化及信號處理等修飾，使其特性接近天然產物。鑒于上述原因，畢赤酵母表達系統(tǒng)成為開發(fā)蛋白類基因工程藥物的首選。 本實驗目的是獲得能夠表達蚓激酶的基因工程酵母菌株。通過PCR擴增目的基因，將其連接到畢赤酵母分泌型表達載體pPIC9K，得到目的基因表達載體。載體經(jīng)線性化后，電擊轉入畢赤酵母GS115中，經(jīng)過組氨酸營養(yǎng)缺陷平板篩選及G418篩選，得到一系列轉化子。經(jīng)PCR驗證，目的基因已經(jīng)轉入酵母體內。Northern dot bl