復(fù)合α干擾素突變體基因在巴斯德畢赤酵母中的表達(dá).pdf

1、中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文復(fù)合α干擾素突變體基因在巴斯德畢赤酵母中的表達(dá)姓名：趙洪亮申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：劉志敏;邊疆2001.6.1A b s t r a c tT o p r e v e n t t h e p o t e n t i a l c l e a v a g eo f t h e C —t e r m i n u s o fc o n S e n S U Si n t e r f e r

2、 o n ( C I F N ) b y K E X 2 ，a K E X 2r e s i s t a n t m u t a n to fC I F N —C I F N ( R 1 6 4 S ) w a sc o n s t r u c t e d ．T h e g e n e c o d i n g f o rC l F N ( R 1 6 4 S ) w a ss y n t h e s i z e da c c o r d

3、 i n gt ot h ep r e f e r e dc o d o nu s a g e o f P f c h J a p a s t o r i s a n d w a s c l o n e di n t oM c h i a p a s t o r i se x p r e s s i o n v e c t o r - p P I C 9 ．A f t e r t r a n s f o r m a t i o n o

4、f P i c h i ap a s t o r E s G S l l 5 ，6t r a n s f o r m a n t sw e r es c r e e n e db y i n d u c t i o ni ns h a k ef l a s ka n dS D S —P A G Eo ft h es u p e r n a t a n t ，w h i c hr e s u l ti n 2 h i g h l y e

5、x p r e s s i n g s t r a i n s ． I n s h a k e f l a s k ，t h ee x p r e s s i o n l e v e l i S a b o u t2 0 m g ／L ．w h i J e i n a5 Lf e r m e n t e rt h e e x p r e s s i o n l e v e l r e a c h e s l O O m g ／L ． A

6、 f t e r p a r t i a lp u r l f i c a t i o n ，t h e p u r i t y o f C l F N ( R 1 6 4 S ) e x c e e d s 9 0 9 6 ，d e t e r m i n e db yr e v e r s ep h a s eH P L C ．A c t i v i t ya s s a yi n d i c a t e sC l F N ( R

7、1 6 4 S ) h a sas p e c i f i ca c t i v i t yo f2 ．5 x 1 0 8U ／m g ．w h i c hi s a b o u t 4 3 ％o f t h a t o f C I F N ．W e s t e r n b l o t t i n g s h o w c sC I F N ( R 1 6 4 S ) c o u l dr e a c tw i t h a n t i —

8、h u m a n I F N —o p o l y c l o n a la n t i b o b y ．M a s ss p e c t r o m e t r ya n a l y s i Sr e v e a l St h em o l e c u l a rw e i g h t o f C I F N ( R 1 6 4 S ) i s 1 9 捌5 0 ．4 4 。w h i c h w e l l m e e t s