豬干擾素-γ基因在畢赤酵母中的分泌表達(dá)及其抗豬瘟病毒活性的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、豬干擾素-γ(PoIFN-γ)是由激活的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生的一類細(xì)胞因子，它具有高效抗病毒和免疫調(diào)節(jié)作用，有廣闊的應(yīng)用前景。為了更好地利用基因工程技術(shù)來(lái)開(kāi)發(fā)重組豬干擾素-γ制劑，本研究將去除信號(hào)肽的豬干擾素-γcDNA基因置于釀酒酵母α因子分泌信號(hào)的DNA序列后，構(gòu)建成能精確分泌表達(dá)PoIFN-γ蛋白的重組表達(dá)載體pPIC9K-α-PoIFN-γ，通過(guò)電轉(zhuǎn)化導(dǎo)入畢赤酵母GS115中，采用G418進(jìn)行篩選，獲得了兩株能夠高效分泌表達(dá)Po

2、IFN-γ的多拷貝插入重組子。提取重組子的基因組DNA，采用PCR方法對(duì)重組子進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明PoIFN-γ成熟多肽基因成功整合到宿主菌的基因組中。重組子經(jīng)甲醇誘導(dǎo)表達(dá)96h后，離心培養(yǎng)物，取上清用75％硫酸銨4℃沉淀過(guò)夜，再用PBS(pH7.4)透析24h，然后進(jìn)行SDS-PAGE和Westernblot分析，結(jié)果表明所獲得的兩株重組子都能分泌表達(dá)出17kD和23kD左右的PoIFN-γ特異蛋白，表達(dá)量分別為105mg/L和108m

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