雜色曲霉素對機體免疫細胞影響的實驗研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文雜色曲霉素對機體免疫細胞影響的實驗研究姓名：邢凌霄申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：張祥宏20040401中文摘要表達的作用。本研究旨在從不同角度了解ST對機體免疫系統(tǒng)的可能影響，揭示ST暴露在我國食管癌高發(fā)區(qū)腫瘤發(fā)生發(fā)展中的可能作用。方法：l小鼠脾細胞IL2、IFNy及IL4表達和分泌的檢測將BALB／c小鼠脫頸致死，浸泡于75％酒精中，無菌取其脾臟，剪碎并過200目銅網(wǎng)，用RPMI一1640

2、培養(yǎng)液沖洗，收集含脾細胞的培養(yǎng)液，滴加適量蒸餾水以破壞紅細胞，1500r／min，離心10min，沉淀再用RPMI1640液洗滌2次，計數(shù)細胞數(shù)后，用完全RPMI—1640培養(yǎng)液調(diào)整為所需濃度。按5106個細胞／mL的濃度接種于含lO％胎牛血清、105U／L青霉素、100mg／L鏈霉素的RPMI一1640培養(yǎng)液中，37℃，5％C02培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)12h后，隨機分為6組，于培養(yǎng)液中加入ST生理鹽水溶解液，使其終濃度分別為0。125mg／L

3、、025mg／L、O5mg／L、1mg／L和2mg／L，對照組加入等容量的生理鹽水。細胞經(jīng)ST預(yù)處理后2h，更換新的不含ST的RPMI，1640培養(yǎng)液，并加入ConA，使其終濃度為10煺／mL，繼續(xù)培養(yǎng)24h，離心收集細胞及培養(yǎng)上清。提取細胞總RNA，用半定量RTPCR方法檢測細胞IL2、IFN7及IL4mRNA的表達，并用雙抗體夾心ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清中l(wèi)L2、IFN—v及IL。4在蛋白水平的表達。2小鼠腹腔巨噬細胞IL12和

4、IL一6表達和分泌的檢測實驗前3天，用石蠟油腹腔注射BALB／c小鼠，2001tL／只。于第4天將小鼠脫頸致死，浸泡于75％酒精中，用10mL冰冷的無血清RPMI。1640培養(yǎng)液灌洗腹腔，無菌收集腹腔滲出細胞。計數(shù)細胞數(shù)后，按5106個細胞／mL的濃度接種于含105U／L青霉素、100mg／L鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液中，37℃、5％C02培養(yǎng)2小時以使巨噬細胞貼壁。棄去培養(yǎng)上清以除去非黏附細胞，加入已在37℃、5％CO，中預(yù)平衡l