雜色曲霉素對體外培養(yǎng)GES-1細(xì)胞CyclinB1、Cdc2和Cdc25C表達(dá)影響的研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文雜色曲霉素對體外培養(yǎng)GES1細(xì)胞CyclinB1、Cdc2和Cdc25C表達(dá)影響的研究姓名：王娟申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：張祥宏邢凌霄20090301中文摘要階段。真核細(xì)胞中，G2M進(jìn)程由細(xì)胞周期蛋白B(CyclinB)Cdc2復(fù)合物調(diào)控。CyelinB1／Cdc2是由Cdc25C激活從而促進(jìn)細(xì)胞從G2期進(jìn)入M期，Cdc25C的活性是細(xì)胞周期進(jìn)入M期的關(guān)鍵之一。因此，在前期研究的基礎(chǔ)之上

2、，本實(shí)驗(yàn)研究了ST對體外培養(yǎng)胃黏膜上皮細(xì)胞的CyclinBl、Cdc2、Cdc25C表達(dá)的影響，以期探討G2期阻滯的相關(guān)分子的變化在ST誘導(dǎo)胃黏膜上皮細(xì)胞G2期阻滯中的意義。方法：1細(xì)胞培養(yǎng)與處理GES1細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清、105U／L青霉素、100mg／L鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，37℃、5％C02培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁生長。選擇對數(shù)生長期的細(xì)胞(傳代后24h)隨機(jī)分為空白對照組、溶劑對照組、實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組給予DMSO溶解、生理鹽水稀

3、釋的ST，使其終濃度分別為100、500、1000、200099／L，對照組給予等體積生理鹽水，溶劑對照組給予等體積DMSO溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h收集細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測。2蛋白免疫印跡(WesternBlotting)提取細(xì)胞總蛋白，用蛋白免疫印跡方法，檢測ST處理后人胃黏膜上皮細(xì)胞GES1中CyclinBl、Cdc2／磷酸化型Cdc2和Cdc25C／j磷酸化型Cdc25C的表達(dá)情況。3細(xì)胞總RNA的提取、鑒定及定量采用異硫氰酸胍一步法