組織型纖溶酶原激活劑（t-PA）對坐骨神經(jīng)血-神經(jīng)屏障損傷后修復(fù)及巨噬細(xì)胞表型的影響.pdf

1、組織型纖溶酶原激活劑(t．PA)是絲氨酸蛋白酶家族的一員，其主要的生物學(xué)功能是激活纖溶酶原(Plasminogen，Plg)轉(zhuǎn)變?yōu)槔w溶酶(Plasmin，P1m)，后者可以降解血栓中的纖維蛋白，用于治療急性心肌梗塞等血栓性疾病。近年來的研究發(fā)現(xiàn)t-PA在外周神經(jīng)系統(tǒng)損傷的恢復(fù)過程中也發(fā)揮了重要的作用。在這些研究過程中發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞在神經(jīng)損傷后的修復(fù)過程中同樣發(fā)揮了重要的作用。而t-PA對巨噬細(xì)胞的功能是否有影響，至今尚未有全面的報(bào)導(dǎo)。

2、 本文首先觀察到脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)體外刺激野生型小鼠腹腔巨噬細(xì)胞4h后，t-PAmRNA水平增高30倍以上，提示t-PA對巨噬細(xì)胞的功能起著一定的作用，因此我們利用野生型小鼠與t-PA基因敲除純合子小鼠，腹腔取巨噬細(xì)胞觀察t-PA基因缺失對巨噬細(xì)胞的吞噬功能，遞呈抗原功能，遷移功能及分泌細(xì)胞因子功能的影響。 巨噬細(xì)胞吞噬功能方面，t-PA基因敲除純合子小鼠巨噬細(xì)胞吞噬酵母及大腸桿菌Esch

3、erichiacoli的功能較野生型小鼠巨噬細(xì)胞增強(qiáng)。可誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(induciblenitricoxidesynthase，iNOS)與巨噬細(xì)胞吞噬殺菌功能成正相關(guān)，在t-PA基因敲除小鼠巨噬細(xì)胞內(nèi)iNOSmRNA水平較野生型小鼠巨噬細(xì)胞高；而精氨酸酶(arginase)與巨噬細(xì)胞吞噬殺菌功能成負(fù)相關(guān)的，在t-PA基因敲除純合子小鼠巨噬細(xì)胞內(nèi)arginasemRNA水平較野生型小鼠巨噬細(xì)胞低。提示與t-PA基因敲除純合子小鼠

4、巨噬細(xì)胞增強(qiáng)的吞噬功能有關(guān)。 巨噬細(xì)胞遞呈抗原功能方面，本文測定了與提呈抗原相關(guān)的MHC口類分子H-2K、H-2D，MHC口類分子I—A，及輔助分子CD86的蛋白表達(dá)情況。我們發(fā)現(xiàn)t-PA基因敲除小鼠巨噬細(xì)胞膜表面分子H-2K表達(dá)下調(diào)，提示t-PA基因敲除小鼠巨噬細(xì)胞提呈抗原功能有所下降。 巨噬細(xì)胞遷移功能方面，結(jié)果顯示t-PA基因敲除小鼠巨噬細(xì)胞在24小時內(nèi)遷移出matrigel的數(shù)量明顯要少于野生型小鼠組。進(jìn)一步的研

5、究顯示，t-PA基因敲除純合子小鼠巨噬細(xì)胞MMP-9的mRNA水平較野生型小鼠下調(diào)，提示t-PA基因敲除小鼠巨噬細(xì)胞遷移功能下降與MMP-9的表達(dá)下調(diào)有關(guān)。 巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子功能方面，我們利用LPS體外刺激巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，并且利用real-timePCR檢測t-PA基因缺失對巨噬細(xì)胞合成細(xì)胞因子IL-6、lL—12、TNFα及MIP．1BmRNA水平的影響。結(jié)果顯示t-PA基因敲除小鼠巨噬細(xì)胞合成細(xì)胞因子mRNA水平較