腦缺血后血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)及保護(hù)作用研究.pdf

1、第一部分腦梗死動(dòng)物模型的制備及MRI與TTC染色對(duì)腦梗死體積的評(píng)價(jià)目的:用線栓法成功制備大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞動(dòng)物模型,并觀察MRI成像和經(jīng)典TTC染色兩種方法對(duì)梗死體積的評(píng)價(jià)是否一致,以探討MRI成像是否可代替TTC染色用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的系列研究.方法:線栓法制作大鼠局灶性左側(cè)大腦中動(dòng)脈閉塞模型,分別于缺血后6h,12h,24h進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分、T2加權(quán)MRI成像,隨后腦切片進(jìn)行TTC染色,分別計(jì)算用MRI和TTC染色兩種方法測(cè)得的梗死灶

2、體積占對(duì)側(cè)大腦半球體積的百分比.結(jié)論:T2加權(quán)MRI成像和TTC染色對(duì)梗死體積的評(píng)價(jià)有很好的一致性,MRI成像能夠反映腦缺血的組織病理變化,且更方便、快捷,是活體重復(fù)評(píng)價(jià)腦梗死的手段,為一系列治療實(shí)驗(yàn)的評(píng)價(jià)提供更多的便利.第二部分腦缺血后VEGF及受體表達(dá)和血管形成關(guān)系研究目的:觀察腦缺血后不同時(shí)間點(diǎn)VEGF及受體表達(dá)與微血管密度的關(guān)系.方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)缺血后3h、6h、24h、3d、7d的VEGF、及受體FLK-1的表達(dá)

3、情況,并用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了VEGF mRNA的表達(dá)時(shí)相.微血管密度的測(cè)定用層粘連蛋白免疫組化法,然后用圖象分析系統(tǒng)對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和陽(yáng)性血管數(shù)進(jìn)行半定量分析.結(jié)論:腦缺血后VEGF及受體的表達(dá)與微血管密度的增多可能是機(jī)體對(duì)抗缺血性腦損傷的一種血管再生的代償性的生理性反應(yīng),這種內(nèi)源性微血管密度的增加是梗死灶的血運(yùn)再建根源,也是外源性治療手段的基礎(chǔ).第三部分皮質(zhì)應(yīng)用VEGF對(duì)腦缺血大鼠的保護(hù)作用研究目的:探討皮質(zhì)應(yīng)用VEGF對(duì)腦缺血大鼠的

4、血管源性反應(yīng)和神經(jīng)保護(hù)作用,研究不同劑量效應(yīng)和不同時(shí)間效應(yīng)對(duì)腦梗死體積、神經(jīng)功能缺損評(píng)分、微血管密度、腦水腫程度、細(xì)胞凋亡等指標(biāo)的影響.方法:實(shí)驗(yàn)1先將大鼠制作成左側(cè)大腦中動(dòng)脈閉塞模型,于缺血后1h開(kāi)始往左側(cè)皮質(zhì)以0.5ul/min速度緩慢注射VEGF164,注射20分鐘,濃度分別為10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml,.每只大鼠各注射3次,每天一次,注射3天,注射時(shí)間分別為梗死后1h,24h,48h.對(duì)照組只注射PBS.于梗

5、死后7d進(jìn)行指標(biāo)觀察.梗死體積的測(cè)定用T2加權(quán)磁共振成像,神經(jīng)功能缺損程度用大鼠5分制評(píng)分法,微血管密度的測(cè)定用層粘連蛋白免疫組化法,腦水腫程度用稱(chēng)重法評(píng)定,細(xì)胞凋亡用TUNEL法,另外用電鏡觀察了組織的超微結(jié)構(gòu)和有無(wú)過(guò)度增殖等.實(shí)驗(yàn)2先將大鼠制作成左側(cè)大腦中動(dòng)脈閉塞模型,于缺血后1h開(kāi)始注射濃度30ug/ml的VEGF164,速度同上,對(duì)照組只注射PBS.于缺血后6h觀察神經(jīng)功能缺損評(píng)分、梗死體積、微血管密度、腦水腫程度、細(xì)胞凋亡等指