化瘀泄?jié)岱綄δI間質(zhì)纖維化實驗大鼠整合素連接激酶的影響.pdf

1、目的：終末期腎臟病(end-stage renal disease， ESRD)的主要病理特征為腎纖維化，包括腎小球硬化及腎間質(zhì)纖維化(tubulointerstitial fibrosis， TIF)。研究表明，慢性腎臟病患者腎間質(zhì)纖維化的嚴重程度較腎小球病變更為重要。腎間質(zhì)纖維化主要表現(xiàn)為細胞外基質(zhì)(extracellular matrix ECM)的大量積聚和間質(zhì)肌成纖維細胞(Myofibroblast， MyoF)的增生。而腎小

2、管上皮細胞轉(zhuǎn)分化(renal tubular epithelial to mesenchymal transition， EMT)在TIF發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor，TGF-β1)是目前所公認的導(dǎo)致腎臟纖維化重要因子，它能通過多種途徑參與EMT。在TGF-β1誘導(dǎo)的EMT過程中整合素連接激酶(integrin linked kinase， ILK)起重要作用。研究提示T

3、GFβ1刺激呈時間和濃度依賴性誘導(dǎo)腎小管上皮細胞特異性表達ILK，同時ILK在TGF-β1/Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的EMT過程中扮演重要的角色，最終導(dǎo)致了腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生。
　　 化瘀泄?jié)岱绞俏覀冊谂R床上用治慢性腎衰竭的常用方，取得了較好的臨床療效。同時前期的實驗我們已經(jīng)證實，化瘀泄?jié)岱侥軌蛞种颇I間質(zhì)纖維化大鼠增殖細胞核抗原的表達，抑制腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化，并能夠通過調(diào)節(jié)TGFβ1/Smad信號通路發(fā)揮對腎間質(zhì)纖維化的拮抗作

4、用。如前所述，ILK可能因為參與TGF-β1/Smad信號通路和激活下游因子從而參與EMT的關(guān)鍵步驟，是EMT過程中的一個重要調(diào)節(jié)者，在腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生發(fā)展過程中有重要作用。因此本研究進一步探討化瘀泄?jié)岱綄δI間質(zhì)纖維化大鼠ILK的影響，為進一步探討腎間質(zhì)纖維化發(fā)生、發(fā)展的機理，探討化瘀泄?jié)岱蕉嗤緩?、多靶點拮抗腎間質(zhì)纖維化的治療作用尋找實驗依據(jù)。
　　 方法：選用雌性、健康SD大鼠50只，體重（180±10）g，清潔級。普通飼料

5、適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，檢測尿糖、尿紅細胞和尿蛋白均為陰性，隨機分為假手術(shù)組、模型組、化瘀泄?jié)岱浇M、阿魏酸哌嗪分散片組、纈沙坦組，每組10只。除假手術(shù)組外其余各組均行左側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)。手術(shù)前1日開始給藥，化瘀泄?jié)岱浇M大鼠經(jīng)口灌服化瘀泄?jié)岱?.7g/(kg·d)；阿魏酸哌嗪分散片組大鼠經(jīng)口灌服阿魏酸哌嗪分散片6.7mg/(kg·d)；纈沙坦組大鼠經(jīng)口灌服纈沙坦5.3mg/(kg·d)；假手術(shù)組和模型組予灌服同等量生理鹽水。給藥至實驗結(jié)束前一天。全

6、部大鼠于實驗第21日全部殺檢，摘取左側(cè)腎臟光鏡下觀察病理形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)法檢測腎組織ILK和Ⅲ型膠原(collagenⅢ，ColⅢ)表達，RT--PCR檢測腎組織ILKmRNA的表達，所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±S)表示，采用單因素方差分析對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析應(yīng)用SPSS統(tǒng)計軟件完成。
　　 結(jié)果：
　　 1.腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察（見Fig1，5-14，Table1）：
　　 腎組

7、織行HE及Masson染色，結(jié)果顯示：模型組于腎間質(zhì)可見大量炎細胞的浸潤和纖維組織的增生，腎小管嚴重萎縮，腎小球數(shù)量減少。其它各治療組間質(zhì)的炎細胞浸潤以及纖維組織增生較模型組減少，腎小管萎縮程度較模型組輕，腎小球數(shù)量無明顯改變。
　　 2.ColⅢ的表達、分布及半定量分析結(jié)果（見Fig2，15-19，Table1）：
　　 主要表達于腎間質(zhì)。假手術(shù)組大鼠表達很弱，其余各組ColⅢ的表達顯著增強。與假手術(shù)組相比，模型組和各

8、治療組ColⅢ的表達顯著性增強，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；與模型組比較，化瘀泄?jié)岱浇M、阿魏酸哌嗪分散片組、纈沙坦組ColⅢ的表達減弱，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其中，化瘀泄?jié)岱浇MColⅢ的表達弱于阿魏酸哌嗪分散片組（P＜0.05），其他各組間ColⅢ的表達均無明顯差異（P＞0.05）。
　　 3.ILK蛋白的表達、分布及半定量分析結(jié)果（見Fig3，20-24，Table2）：
　　 ILK主要表達于腎小管

9、上皮細胞胞漿中，假手術(shù)組ILK在腎小管上皮細胞中表達很弱。與假手術(shù)組比較，模型組和各治療組ILK的表達顯著增強，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；與模型組相比，化瘀泄?jié)岱浇M、阿魏酸哌嗪分散片組、纈沙坦組ILK的表達減弱，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，其中，化瘀泄?jié)岱浇MILK的表達優(yōu)于阿魏酸哌嗪分散片組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其他各組間均無明顯差異（P＞0.05）。2.5ILK mRNA的表達及半定量分析結(jié)果（見Fig4，

10、25-26，Table2）ILK RT-PCR半定量分析結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組和各治療組ILK的表達顯著增強，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；與模型組相比，化瘀泄?jié)岱浇M、阿魏酸哌嗪分散片組、纈沙坦組ILK的表達減弱，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其中，化瘀泄?jié)岱浇MILK的表達弱于阿魏酸哌嗪分散片組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其他各組間均無明顯差異(P＞0，05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.化瘀泄?jié)?/p>