天府肉羊CTSL、CTSH和CTSF基因克隆及其在部分組織器官中的表達(dá)分析.pdf

1、肉質(zhì)性狀是畜禽生產(chǎn)中最重要的經(jīng)濟(jì)性狀之一，因而近年來(lái)對(duì)影響畜禽肉質(zhì)性狀基因的研究已成為動(dòng)物分子遺傳育種工作的熱點(diǎn)。組織蛋白酶(cathepsin)家族屬于半胱氨酸蛋白酶類，它不僅能水解肌纖維中的蛋白，而且還能使動(dòng)物的結(jié)締組織變松散，進(jìn)而影響到肉的嫩度。在豬、牛和魚類的有關(guān)研究結(jié)果表明，組織蛋白酶基因家族成員可以作為影響畜禽的肉質(zhì)性狀候選基因，但在山羊方面卻未見(jiàn)有類似報(bào)道。
　　本研究運(yùn)用RT-PCR結(jié)合克隆測(cè)序方法分別獲得了天府肉

2、羊CTSL基因、CTSH基因、CTSF基因的全編碼區(qū)序列。結(jié)果顯示，天府肉羊CTSL基因長(zhǎng)1103bp包括有1005bp的開(kāi)放閱讀框，編碼334個(gè)氨基酸，序列提交得到登錄號(hào):KF953544.1。CTSL氨基酸存在信號(hào)肽，含有17個(gè)磷酸化位點(diǎn)，屬于親水性非跨膜蛋白。序列預(yù)測(cè)表明CTSL氨基酸序列含有兩個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域，即inhibitor_129結(jié)構(gòu)域和Pept_C1結(jié)構(gòu)域。氨基酸序列同源性分析顯示天府肉羊CTSL氨基酸序列和其它哺乳動(dòng)物

3、之間有很高的相似性。氨基酸序列同源性分析和系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示天府肉羊CTSL與綿羊CTSL具有很近的遺傳關(guān)系。CTSL的二級(jí)結(jié)構(gòu)以a螺旋和無(wú)歸卷曲為主。
　　天府肉羊CTSH基因長(zhǎng)1043bp包括有1008bp的編碼區(qū)，編碼335個(gè)氨基酸，序列提交得到登錄號(hào):KJ650499。CTSH氨基酸存在信號(hào)肽，有11個(gè)磷酸化位點(diǎn)，屬于親水性非跨膜蛋白。CTSH也含有inhibitor129結(jié)構(gòu)域和Pept_C1結(jié)構(gòu)域。氨基酸序列同源性分析和

4、系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示天府肉羊CTSH和其它哺乳動(dòng)物的CTSH有很近的遺傳關(guān)系。CTSH二級(jí)結(jié)構(gòu)以a螺旋和無(wú)歸卷曲為主。
　　天府肉羊CTSF基因長(zhǎng)1477bp包括有1383bp的編碼區(qū)，編碼460個(gè)氨基酸，序列提交得到登錄號(hào):KJ650498。它含有28個(gè)磷酸化位點(diǎn)，存在信號(hào)肽序列，屬于親水性非跨膜蛋白。氨基酸序列同源性分析和系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示天府肉羊CTSF與牛和綿羊的CTSF具有很近進(jìn)化關(guān)系。CTSF二級(jí)結(jié)構(gòu)以a螺旋和無(wú)歸卷曲為主。

5、
　　實(shí)時(shí)熒光定量分析了12月齡天府肉羊CTSL基因、CTSH基因和CTSF基因在心肌、肝臟、肺、腎臟、胸肌、腹殖肌、股二頭肌和膈肌等8個(gè)組織的相對(duì)表達(dá)情況，及其在1日齡、6月齡、12月齡和18月齡階段天府肉羊的肺和股二頭肌組織中相對(duì)表達(dá)的情況。結(jié)果顯示，CTSL基因、CTSH基因和CTSF基因在8個(gè)組織中都有表達(dá)，且都是在肺中的表達(dá)量最高。在肺中，3個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)量都是隨年齡的增加而呈現(xiàn)先升高再降低的趨勢(shì);在股二頭肌組織中，C