健腦顆粒治療腦動(dòng)脈硬化機(jī)理初探.pdf

1、目的：通過整體動(dòng)物和體外細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，從整體動(dòng)物、組織、細(xì)胞和分子生物學(xué)的不同水平，觀察中藥健腦顆粒對(duì)腦動(dòng)脈硬化的防治及對(duì)受損神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用，并初步探索其作用機(jī)理。
　　 方法：
　　 1.采用高血壓合并高血脂法復(fù)制大鼠腦動(dòng)脈硬化模型：以雙腎雙夾法制備腎性高血壓模型、再喂飼高脂飼料制成高血壓合并高血脂大鼠腦動(dòng)脈硬化模型，觀察血壓、血脂，血漿NO、ET、TXB2、6-Keto-PGF1。水平等的變化，結(jié)合腦血管及腦組

2、織病理形態(tài)學(xué)檢查作為確認(rèn)模型形成的綜合觀測(cè)指標(biāo)。
　　 2.取上述腦動(dòng)脈硬化模型大鼠，隨機(jī)分為模型對(duì)照組、陽性藥(桂利嗪)對(duì)照組及健腦顆粒治療給藥和預(yù)防給藥的大、小劑量組，另設(shè)偽手術(shù)對(duì)照組作為正常對(duì)照。造模給藥14周后，檢測(cè)并記錄各組大鼠的血壓、心率、腦血流，分別測(cè)定血清抗氧化水平(SOD、MDA、GSH-PX)、脂質(zhì)水平(TC、TG、HDL-C、LDL-C)等相關(guān)指標(biāo)及血漿中NO、ET、TXB2、6-Keto-PGF1。等的含

3、量，觀察腦指數(shù)、腦含水量的變化，同時(shí)測(cè)定腦組織中NO、ET含量及其抗氧化水平(SOD、MDA、GSH-PX)，并用原位雜交法觀察用藥后對(duì)腦神經(jīng)細(xì)胞iNOS mRNA、ET-1 mRNA表達(dá)的影響，對(duì)腦血管及腦組織進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)檢查，觀測(cè)對(duì)腦血管、腦組織損傷的保護(hù)與修復(fù)作用。
　　 3.采用低糖DMEM培養(yǎng)液建立PC12細(xì)胞的低糖模型、連二亞硫酸鈉造成PC12細(xì)胞缺氧損傷模型、H2O2造成PC12細(xì)胞自由基損傷模型，分別給予健腦顆

4、粒各濃度藥液及大、中、小灌胃劑量的含藥血清進(jìn)行干預(yù)，觀察各組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，測(cè)定各組上清LDH活力，并用MTT法測(cè)定細(xì)胞活力。
　　 4.采用灌胃給藥法進(jìn)行小鼠急性毒性試驗(yàn)，初步評(píng)價(jià)其安全性。
　　 結(jié)果：
　　 1.使用高血壓合并高血脂法成功建立大鼠腦動(dòng)脈硬化模型，模型大鼠的血壓、血脂明顯升高，ET/NO、TXB2/6-Keto-PGF1。比值也明顯上升，且腦血管及腦組織病理形態(tài)學(xué)檢查與患者的臨床病理改變相仿

5、。
　　 2.整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：健腦顆粒治療給藥和預(yù)防給藥大、小劑量組均能顯著降低腦動(dòng)脈硬化大鼠的收縮壓、舒張壓和平均動(dòng)脈壓，減緩心率，明顯提高模型大鼠的腦血流量；降低血漿ET/NO,TXB2/6-Keto-PGF1。比值，降低血清總膽固醇含量及LDL-C/HDL-C比值；明顯提高血清SOD和GSH-PX活力，同時(shí)降低MDA含量；能明顯降低腦指數(shù)、腦含水量及腦組織中NO、ET含量，降低腦神經(jīng)細(xì)胞iNOSmRNA、ET-1 m

6、RNA的表達(dá)；對(duì)腦組織抗氧化水平也能有所改善；病理形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果表明健腦顆粒能明顯抑制腦組織缺血性病變和腦血管動(dòng)脈硬化癥狀的形成，這些可能是健腦顆粒治療腦動(dòng)脈硬化癥的主要作用機(jī)理。
　　 3.體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：缺糖、缺氧、自由基損傷后的PC12細(xì)胞活力下降，LDH活力明顯增高；健腦顆粒藥液及含藥血清可使細(xì)胞活力增強(qiáng)，LDH活力降低；形態(tài)學(xué)觀察也證實(shí)，給予健腦顆粒藥液或含藥血清能明顯減輕缺糖、缺氧、自由基損傷的PC12細(xì)胞形態(tài)學(xué)的