哈密瓜內(nèi)生拮抗細菌抗菌活性物質(zhì)研究.pdf

1、本論文從378株哈密瓜內(nèi)生細菌中篩選出了對瓜類細菌性葉斑病菌、疫霉病菌具有高抗菌活性的拮抗菌株，研究了拮抗菌株產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的種類、性質(zhì)、穩(wěn)定性、產(chǎn)生條件及抗菌機制，為內(nèi)生生防菌抗菌機制的分子生物學和遺傳改良研究，挖掘新的抗病基因資源，創(chuàng)制優(yōu)良生防制劑提供科學基礎。 研究結果顯示：在哈密瓜內(nèi)生細菌中廣泛存在具有高抗菌活性的菌株。通過測定拮抗菌株胞外代謝產(chǎn)物的抑菌活性，復篩出胞外代謝物中活性較高的抑菌物質(zhì)，其中194、197菌株的胞

2、外代謝物表現(xiàn)出高抗菌活性．溫室生物測定證明，197菌株的菌體和胞外代謝物對細菌性葉斑病菌和疫霉病菌具有雙重顯著抗菌活性，還同時具有促進種子發(fā)芽和促進生長的作用，胞外代謝物防病效果較菌體更為顯著。 對內(nèi)生拮抗菌株產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的初步分析表明，試驗分離篩選出的內(nèi)生拮抗菌株能產(chǎn)生細菌素，幾丁質(zhì)酶，嗜鐵素等多種抑菌代謝產(chǎn)物，產(chǎn)生抑菌活性物質(zhì)是其抗菌作用的重要機制。 對試驗篩選出的高拮抗活性菌株197的抗菌物質(zhì)進行了研究。結果表明，

3、197菌株的代謝抗菌物質(zhì)為蛋白質(zhì)類，可通過15﹪-90﹪的(NH<,4>)<,2>SO<,4>鹽析和濃縮，其蛋白含量與其抗菌活性呈正相關，75﹪(NH<,4>)<,2>SO<,4>是抗菌蛋白提取的最適鹽析飽和度。 采用PAGE和SDS-PAGE凝膠電泳法從197菌株的粗蛋白提取物中檢測分離到了P5-3和P5-6兩種抗菌蛋白成分。對其中抑菌活性較強P5-3抗菌蛋白進行純化，得到了電泳純的抗菌蛋白，分子量約為45KD，有兩條鏈組成。

4、該抗菌蛋白與已報道的抗菌蛋白有一定差別，可能為一種新的未知抗菌蛋白。 該抗菌蛋白具有較強的熱穩(wěn)定性，120℃高溫處理10min仍能保持部分抑菌活性。對pH值適應范圍較寬，在pH8的堿性條件下更為穩(wěn)定。對蛋白酶K敏感，對胰蛋白酶部分敏感，對紫外線有很強的穩(wěn)定性，4℃低溫下存放42天后仍可保持抑菌活性。 197菌株抗菌蛋白抗菌譜的測定結果顯示，該抗菌蛋白抗菌譜較廣，對多種病原菌具有抗菌作用。其抗菌作用表現(xiàn)在能顯著抑制疫霉菌孢