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文檔簡介
1、棗實蠅(Carpomya vesuviana Costa)是2007年首次在新疆吐魯番地區(qū)發(fā)現(xiàn)的重大檢疫性害蟲，系在新疆乃至全國棗產(chǎn)業(yè)上有著重要經(jīng)濟意義的害蟲。棗實蠅的鑒定是國內(nèi)外棗貿(mào)易中最突出的技術問題之一，建立檢疫性棗實蠅特別是未成熟蟲態(tài)快速可靠的鑒定方法在植物檢疫上有重要意義。
本研究以國內(nèi)普遍關注的檢疫性害蟲棗實蠅為研究對象，測定了棗實蠅的mtDNA COⅠ和Cytb基因部分序列，將獲得的基因片段與已公開報道的其它同源
2、序列進行比較分析，設計了棗實蠅15對引物基礎上，應用種特異引物PCR(SS-PCR)和SYBR Green實時熒光PCR技術，篩選出了棗實蠅的特異性引物，在此基礎上研發(fā)了檢疫性棗實蠅的分子生物學快速鑒定技術。主要研究結(jié)果如下:
1.首次提取了棗實蠅基因組DNA，分別測定棗實蠅mtDNACOⅠ兩段不同的基因序列和cytb部分基因序列;首次將吐魯番棗實蠅序列錄入GenBank數(shù)據(jù)庫，序列號分為HQ687210,JX515609和J
3、X101439。
2.首次以目標棗實蠅線粒體DNA(mtDNA)中COⅠ基因序列(GenBank序列號:HQ687210)為目標序列，借助Mega4軟件（DNASTAR公司，美國）中CLUSTAL方法，與已知其它種類的實蠅的COⅠ基因序列（包括本研究和其它公開報道的序列）進行比較分析，通過篩選獲得能特異鑒定棗實蠅的引物1對，從而建立了棗實蠅特異引物PCR鑒定技術。
3.本研究應用PCR—RFLP技術，將新入侵的檢疫性
4、害蟲棗實蠅比對我國口岸截獲頻率較高的5種檢疫性實蠅進行快速鑒定，其目的在于尋找出適用于新入侵檢疫性害蟲棗實蠅快速而又準確的鑒定技術。
4.利用自行設計的特異引物，應用SYBR Green實時熒光PCR技術，建立了SYBR Green實時熒光PCR(SG-PCR)快速鑒定棗實蠅的方法，SYBR Green實時熒光PCR產(chǎn)物特異性通過溶解曲線分析來確認。
5.首次克隆了檢疫性害蟲棗實不同地理種群mtDNA COⅠ基因從M
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