自體富血小板凝膠在難治性糖尿病皮膚潰瘍中的應(yīng)用及可能的作用機(jī)制探討.pdf

1、第一部分自體富血小板凝膠在糖尿病難治性皮膚潰瘍中的應(yīng)用-預(yù)試驗(yàn)研究 目的：評(píng)價(jià)自體富血小板凝膠(APG)治療糖尿病難治性皮膚潰瘍的可行性、有效性和安全性，探索治療糖尿病難治性皮膚潰瘍的新方法。 對(duì)象與方法：自2005年7月至2007年4月，我科共收治糖尿病皮膚潰瘍患者117例。將入院后經(jīng)嚴(yán)格控制血糖、血壓、抗凝、抗感染及潰瘍局部標(biāo)準(zhǔn)(清創(chuàng)、引流、減壓、交換敷料等)治療，2周后潰瘍無(wú)好轉(zhuǎn)跡象或惡化的患者定義為難治性皮膚潰瘍

2、。13例難治性皮膚潰瘍?nèi)脒xAPG治療，其中12例有竇道，1例有骨髓炎；背部深部潰瘍2例，褥瘡3例(Ⅳ級(jí))，小腿潰瘍1例，足部潰瘍7例(Wagner分級(jí)Ⅲ一Ⅳ級(jí))。取患者自身外周靜脈血，經(jīng)離心、分離、濃縮制得的富含血小板血漿(PRP)按一定比例與凝血酶一鈣劑混合凝固形成APG，然后用雙通注射器將APG均勻噴灑至潰瘍表面或注射至深部竇道內(nèi)。治療前和治療后每周測(cè)量潰瘍面積直至潰瘍愈合或第12周末，有竇道的患者測(cè)量竇道體積，同時(shí)記錄患者的體溫和

3、不良反應(yīng)。 結(jié)論：APG用于治療糖尿病難治性皮膚潰瘍是安全有效的，特別適用于潰瘍面積較大和有竇道的患者，局部血供較好的神經(jīng)性糖尿病足潰瘍患者，但不適用于缺血性潰瘍及存在骨髓炎且感染未得到控制的患者。 第二部分自體富血小板凝膠的制備及其所含生長(zhǎng)因子分析 目的：探討手工操作二次差速離心制備APG的方法，通過(guò)改變離心速度比較不同的離心力對(duì)血小板富集的影響，以期找到較好的離心方法，提高血小板的富集率；分析全血和APG中轉(zhuǎn)

4、化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、血小板源性生長(zhǎng)因子(PDGF-BB)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)和胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-1)濃度。 方法： (1) 富血小板血漿(platelet-rich plasma)的制備：抽取靜脈血，注入無(wú)菌離心管，離心后汲取上層血漿至紅細(xì)胞層；將汲取的血漿再次離心，棄去上層血漿，下層即為PRP。共選擇3種離心速度：A：先以2600rpm離心4分鐘，再以3800rpm離心

5、6分鐘；B：先以2000rpm離心4分鐘，再以4000rpm離心6分鐘；C：先以1500rpm離心5分鐘，再以4000rpm離心5分鐘，離心前后進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)。 (2)APG的制備：將PRP與凝血酶.鈣劑以10：1混合凝固后為APG。 (3)酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定全血和.APG中PDGF-BB、VEGF、IGF-1、EGF和TGF-β1等5種生長(zhǎng)因子濃度。統(tǒng)計(jì)采用配對(duì)t檢驗(yàn)和Pearson相關(guān)分析。 結(jié)論：二次差速離

6、心法中B法(以313×g力離心4分鐘，再以1252×g力離心6分鐘)為最佳離心方法；APG中生長(zhǎng)因子濃度高于全血中生長(zhǎng)因子濃度；血小板數(shù)量與PDGF-BB、TGF-β1濃度呈正相關(guān)。 第三部分自體富血小板凝膠治療糖尿病難治性皮膚潰瘍可能的作用機(jī)制 目的：通過(guò)對(duì)APG治療前后不同治療時(shí)間段潰瘍?nèi)庋拷M織生長(zhǎng)因子水平的測(cè)定，觀察組織中生長(zhǎng)因子濃度變化與潰瘍愈合之間的關(guān)系，探討APG治療糖尿病難治性皮膚潰瘍可能的作用機(jī)制。

7、 材料與方法：分別于治療前和治療后3、6、9、15天取潰瘍局部肉芽組織，-80℃冰箱保存；使用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、血小板源性生長(zhǎng)因子(PDGF-BB)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)和胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-1)濃度；觀察相應(yīng)時(shí)間潰瘍縮小面積。統(tǒng)計(jì)采用配對(duì)t檢驗(yàn)和Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。 結(jié)論： APG中血小板激活后逐步釋放多種生長(zhǎng)因子導(dǎo)致潰瘍組織局部生長(zhǎng)因子水平升高