As-,2-O-,3-對大鼠生精細(xì)胞凋亡及其Bcl-2、Bax和Fas、FasL調(diào)控途徑影響的研究.pdf

1、目的：1.檢測對照組與各實驗組大鼠每日精子生成量(Daily Sperm Production，DSP)，研究砷對大鼠精子生成的影響；2.定性、定位、半定量檢測對照組與各實驗組大鼠各級生精細(xì)胞凋亡，以證實砷是否誘導(dǎo)生精細(xì)胞凋亡；3.定位和半定量檢測對照組與各實驗組大鼠睪丸生精細(xì)胞Bcl-2、Bax和Fas、FasL表達(dá)，觀察Bcl-2、Bax及Fas、FasL在各級生精細(xì)胞中的表達(dá)，探討砷的雄性生殖毒性與生精細(xì)胞Bcl-2、Bax及Fa

2、s、FasL的關(guān)系，從分子水平研究砷致生精細(xì)胞損害的作用機(jī)制以及途徑，為進(jìn)一步研究砷的男(雄)生殖毒理和貴州省地方性砷中毒的有效預(yù)防、控制、治療提供理論基礎(chǔ)。 方法：1.用0.375 mg/kg、0.75 mg/kg、1.5 mg/kg As2O3水溶液灌胃方式建立慢性砷中毒SD大鼠動物模型，分別設(shè)為低劑量組、中劑量組和高劑量組，同時設(shè)正常對照組；2.參考Blazak的方法檢測對照組與各實驗組SD大鼠DSP；3.通過末端轉(zhuǎn)移酶介

3、導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)，定性、定位、半定量檢測對照組與各實驗組SD大鼠各級生精細(xì)胞凋亡；4.免疫組織化學(xué)法對睪丸生精細(xì)胞Bcl-2、Bax及Fas、FasL表達(dá)進(jìn)行定位和半定量檢測，觀察Bcl-2、Bax及Fas、FasL在對照組與各實驗組大鼠各級生精細(xì)胞中的表達(dá)；5.對生精細(xì)胞凋亡與DSP、生精細(xì)胞Bcl-2、Bax及Fas、FasL表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行分析。 結(jié)果：1.低劑量組SD大鼠DSP較對照組有所降低，但

4、無顯著性差異；中、高劑量組DSP明顯降低，且隨染毒劑量的增高而降低；2.對照組與各實驗組SD大鼠睪丸生精小管中均有生精細(xì)胞凋亡，以精原細(xì)胞和精母細(xì)胞為主；低劑量組生精細(xì)胞凋亡指數(shù)(Apoptosis Index，AI)與對照組比較，無顯著性差異；中、高劑量組生精細(xì)胞AI值明顯升高，并隨染毒劑量的增大而升高；3.對照組與各實驗組SD大鼠睪丸精原細(xì)胞和精母細(xì)胞可檢測到Bcl-2、Bax及Fas、FasL的表達(dá)，在支持細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞和精子中無

5、表達(dá)；低劑量組生精細(xì)胞Bcl-2、Bax及Fas、FasL的表達(dá)與對照組比較無顯著性差異，中、高劑量組生精細(xì)胞Bcl-2的表達(dá)明顯降低，Bax、Fas、FasL的表達(dá)明顯升高；4.DSP與生精細(xì)胞凋亡的相關(guān)性分析顯示，二者間呈顯著負(fù)相關(guān)；5．生精細(xì)胞凋亡與Bcl-2的表達(dá)之間呈顯著負(fù)相關(guān)；生精細(xì)胞凋亡與Bax、Fas、FasL的表達(dá)之間呈顯著正相關(guān)。 結(jié)論：1．慢性接觸0.75 mg/kg和1.5mg/kg As2O3可通過誘導(dǎo)

6、SD大鼠生精細(xì)胞凋亡增加，致每日精子生成量減少，二者存在劑量-效應(yīng)關(guān)系；2．As2O3的雄性生殖細(xì)胞毒性機(jī)制之一可能是通過下調(diào)SD大鼠生精細(xì)胞Bcl-2的表達(dá)和上調(diào)Bax的表達(dá)，使細(xì)胞凋亡和存活信息平衡失調(diào)從而誘發(fā)生精細(xì)胞凋亡增加，導(dǎo)致精子生成量下降；3．As2O3的雄性生殖細(xì)胞毒性機(jī)制之一可能同時通過上調(diào)SD大鼠生精細(xì)胞Fas、 FasL的表達(dá)水平，啟動細(xì)胞凋亡的細(xì)胞內(nèi)死亡信號傳遞途徑，誘發(fā)生精細(xì)胞凋亡增加，從而導(dǎo)致精子生成量下降；4