何首烏飲對(duì)衰老大鼠腎皮質(zhì)增殖與凋亡的影響.pdf

1、近年來(lái)研究表明老年腎臟疾病的發(fā)生與腎臟的衰老、腎功能的減退密切相關(guān)，腎臟細(xì)胞增殖與凋亡的動(dòng)態(tài)關(guān)系在腎衰老及疾病的發(fā)生中起到重要作用。根據(jù)我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)記載何首烏有補(bǔ)腎作用。本實(shí)驗(yàn)首先建立D-半乳糖誘導(dǎo)的亞急性衰老大鼠模型，通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)分別檢測(cè)PCNA、Bax、Bcl-2、Fas、Fasl、Caspase-3在衰老大鼠腎臟皮質(zhì)的表達(dá)，原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)細(xì)胞凋亡，蛋白印跡法檢測(cè)Bcl-2、Bax的表達(dá)。初步探討何首烏飲對(duì)

2、衰老大鼠腎皮質(zhì)增殖與凋亡的影響及其療效機(jī)理，為研究衰老機(jī)制及開(kāi)發(fā)臨床抗衰老藥物提供理論依據(jù)。 目的： 研究中藥何首烏飲對(duì)衰老大鼠腎皮質(zhì)增殖及凋亡的影響。 方法： 造模及實(shí)驗(yàn)分組：50只雌性SD大鼠隨機(jī)分成陰性對(duì)照組、模型組、何首烏飲低、中、高劑量組每組10只。陰性對(duì)照組腹腔注射等體積生理鹽水，其余4組大鼠腹腔注射D-半乳糖300 mg·kg-1(用生理鹽水配制成6％的溶液)，連續(xù)60d，制備亞急性衰老大鼠

3、模型。給藥組在造模第一日起同時(shí)每天一次灌胃何首烏飲，連續(xù)60d。 大鼠經(jīng)4％多聚甲醛灌注固定，取雙側(cè)腎臟，常規(guī)石蠟包埋、切片片厚5μm。HE染色觀察腎臟皮質(zhì)形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化； SP免疫組化檢測(cè)PCNA， Bcl-2，Bax，F(xiàn)as，F(xiàn)asl，Caspase-3在衰老大鼠腎臟皮質(zhì)的表達(dá)，原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。大鼠斷頭處死，取雙側(cè)腎臟皮質(zhì)，Western印跡分析方法檢測(cè)大鼠腎皮質(zhì)臟Bax，Bcl-2蛋白

4、的表達(dá)情況。 結(jié)果： 形態(tài)學(xué)觀察：中藥組腎皮質(zhì)組織結(jié)構(gòu)較模型組有明顯改善，中、高劑量組與陰性對(duì)照組接近。腎小球和腎小管結(jié)構(gòu)趨于正常，腎小球數(shù)量增多，腎小管管壁增厚，近端小管刷狀緣明顯。 免疫組化染色：PCNA蛋白表達(dá)：模型組大鼠腎皮質(zhì)PCNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯低于陰性對(duì)照組(P＜0.05)，何首烏飲高、中劑量組PCNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均高于模型組(P＜0.05)，高劑量組高于中劑量組P＜0.05)。Bcl-2蛋白表達(dá)：模型

5、組Bcl-2表達(dá)低于陰性對(duì)照組(P＜0.05)，何首烏飲高劑量組與模型組比較表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05)。何首烏飲中、低劑量組與模型組比較均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。Bax蛋白變化：模型組Bax表達(dá)明顯高于陰性對(duì)照組(P＜0.05)，何首烏飲各劑量組與模型組比較表達(dá)減弱P＜0.05)。Fas蛋白變化：模型組Fas表達(dá)量明顯高于陰性對(duì)照組(P＜0.05)，而何首烏飲各劑量組與模型組比較Fas表達(dá)減弱(P＜0.05)。Fas1蛋白表達(dá)：Fas

6、1的表達(dá)在各實(shí)驗(yàn)組均有顯著差異(P＜0.05)，模型組的表達(dá)量明顯高于陰性對(duì)照組(P＜0.05)，何首烏飲各劑量組與模型組比較表達(dá)減弱(P＜0.05).Caspase-3蛋白表達(dá)：模型組表達(dá)量明顯高于陰性對(duì)照組(P＜0.05)，而何首烏飲高、中劑量組可下調(diào)Caspase-3的表達(dá)(P＜0.05)，低劑量組與模型組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 TUYNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡：模型組大鼠腎皮質(zhì)TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)高于陰性對(duì)照組(P＜0.0

7、5)，何首烏飲各劑量組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均低于模型組(P＜0.05)。 蛋白印跡：Bcl-2蛋白表達(dá)：模型組大鼠腎皮質(zhì)Bc1-2蛋白表達(dá)明顯低于陰性對(duì)照組(P＜0.05)，預(yù)防中、高劑量組表達(dá)高于模型組(P＜0.05)。Bax蛋白表達(dá)：模型組大鼠腎皮質(zhì)Bax蛋白表達(dá)明顯高于陰性對(duì)照組(P＜0.05)，預(yù)防組各組表達(dá)低于模型組(P＜0.05)。 結(jié)論： 何首烏飲可能一方面通過(guò)上調(diào)衰老大鼠腎皮質(zhì)PCNA的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞增殖；