TNF-a和Il-13對(duì)人肝星狀細(xì)胞膠原蛋白生成的影響.pdf

1、目的：
　　 白細(xì)胞介素-13(Interleukine-13，IL-13)是一種Th2型多效能細(xì)胞因子。已證實(shí)IL-13是致纖維化的首要細(xì)胞因子，可以與IL-13受體alpha1(IL-13Rα1)結(jié)合從而產(chǎn)生促纖維化作用。此外，IL-13另一受體IL-13受體alpha2(IL-13Rα2)，其可競(jìng)爭(zhēng)性抑制IL-13Rα1與IL-13的結(jié)合，從而導(dǎo)致IL-13的JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中斷，抑制其促纖維化的過程。

2、　　 腫瘤壞死因子-α(TNF-α)是一種主要由單核細(xì)胞/吞噬細(xì)胞產(chǎn)生的、具有廣泛生物學(xué)活性的細(xì)胞因子。TNF-α可通過抑制TGF-β1的表達(dá)從而抑制TGF-β1的促纖維化作用，進(jìn)而達(dá)到抑制纖維化的目的。最近研究發(fā)現(xiàn)在肺、皮膚等組織的成纖維細(xì)胞中，TNF-α可與IL-4共同作用上調(diào)IL-13Rα2的表達(dá)，從而達(dá)到抑制IL-13致纖維化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　 本實(shí)驗(yàn)主要研究TNF-α和IL-13對(duì)人肝星狀細(xì)胞LX-2的IL-13

3、受體表達(dá)的影響，以及對(duì)人肝星狀細(xì)胞LX-2膠原蛋白合成的影響，為研究肝纖維化發(fā)生和發(fā)展機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1.臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)LX-2細(xì)胞的活性。
　　 2.HE染色法觀察LX-2細(xì)胞形態(tài)。
　　 3.RT-PCR檢測(cè)不同時(shí)間、不同劑量IL-13、TNF-α刺激LX-2細(xì)胞對(duì)IL-13Rα1mRNA、IL-13Rα2mRNA和I型膠原蛋白(procollagen type I，PCOLI)

4、mRNA表達(dá)的影響。
　　 4.RT-PCR檢測(cè)不同組別PCOLI mRNA的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)分四組：空白對(duì)照組、IL-13組、TNF-α組及IL-13+TNF-α組。
　　 5.羥脯氨酸實(shí)驗(yàn)定量檢測(cè)總膠原蛋白的含量。
　　 結(jié)果：
　　 1.LX-2細(xì)胞的活性良好，IL-13和TNF-α對(duì)細(xì)胞都無(wú)毒性作用。
　　 2.HE染色法鏡下觀察LX-2細(xì)胞呈星狀，胞核呈橢圓形。
　　 3.RT-PCR

5、檢測(cè)結(jié)果顯示，TNF-α、IL-13刺激LX-2細(xì)胞對(duì)IL-13Rα1mRNA的表達(dá)沒有影響；LX-2細(xì)胞IL-13Rα2表達(dá)缺失。
　　 4.RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，TNF-α刺激LX-2細(xì)胞后PCOLI mRNA表達(dá)下調(diào)，與劑量呈負(fù)相關(guān)；IL-13刺激LX-2細(xì)胞后PCOLI mRNA表達(dá)有不同程度上調(diào)，其中50ng/ml組最為顯著。
　　 5.羥脯氨酸實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示：對(duì)照組為6.58μg/mgprotein；T

6、NF-α組膠原蛋白含量隨TNF-α劑量增加而逐漸減少；膠原蛋白含量IL-135ng/ml組和10ng/ml組與對(duì)照組相當(dāng)，而IL-1320ng/ml組和50ng/ml組高于對(duì)照組，其中50ng/ml組最為顯著，且二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1.IL-13、TNF-α對(duì)LX-2細(xì)胞IL-13Rα1 mRNA的表達(dá)無(wú)影響。
　　 2.TNF-α下調(diào)LX-2細(xì)胞PCOLI mRNA的表達(dá)，與劑量呈負(fù)相關(guān)