2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、肝星狀細胞(hepatic stellate cell HSC)是ECM的主要來源,正常情況下肝星狀細胞處于靜止?fàn)顟B(tài)。HSC表現(xiàn)為富含維生素A脂滴的靜止型,基本功能主要有:①代謝和貯存維生素A,②儲存脂肪,③合成和分泌膠原及糖蛋白、蛋白多糖等基質(zhì)成分,④合成基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinase MMPs)及其組織抑制劑(tissue inhibitor of metalloprot-einases,TIMPs)

2、,⑤表達細胞因子及受體,⑥參與肝竇血流調(diào)節(jié)。當(dāng)肝臟受到炎癥或機械刺激等損傷時,肝星狀細胞被激活,其表型由靜止型轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ钚?。肝星狀細胞激活后可以分泌和增生細胞外基質(zhì),通過這點參與肝纖維化的形成并重建肝內(nèi)結(jié)構(gòu),此外還可以提升肝竇內(nèi)的壓力。當(dāng)受到一些物理或化學(xué)刺激后,HSC激活并轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞樣細胞(myofibroblast cells,MFC),各種致纖維化因素均把HSC作為最終靶細胞。
  肝纖維化發(fā)生發(fā)展過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是

3、肝星狀細胞的持續(xù)激活,當(dāng)肝星狀細胞被激活后可以增生和分泌細胞外基質(zhì)。肝星狀細胞激活后轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞樣細胞(MFC),各種致HSC位于Disse間隙內(nèi),緊貼著肝竇內(nèi)皮細胞(sinusoidal endothelial cells,SEC)和肝細胞。其形態(tài)不規(guī)則,胞體呈圓形或不規(guī)則形,常伸出數(shù)個星狀胞突包繞著肝血竇。分泌出的細胞外基質(zhì)會參與肝內(nèi)結(jié)構(gòu)的重建并且促進肝纖維化的形成。肝星狀細胞的激活過程十分復(fù)雜,包括兩個主要階段:啟動階段及持

4、續(xù)階段。此外,肝星狀細胞激活后可以使肝竇內(nèi)壓升高也是肝纖維化的病理基礎(chǔ)。持續(xù)階段則是這些刺激因素維持肝星狀細胞的活化表型,結(jié)果引起肝纖維化形成。
  膠原是細胞外基質(zhì)的主要成份,在發(fā)生肝纖維化時人體內(nèi)膠原比正常時增加5-7倍,其中以Ⅰ、Ⅲ型增加為主,Ⅰ型膠原較Ⅲ型膠原增加明顯,含量達60%-70%。激活的肝星狀細胞能表達出成纖維細胞的特征,其胞質(zhì)中維生素A減少甚至缺乏,細胞收縮生成膠原纖維。細胞核內(nèi)膠原相關(guān)遺傳信息經(jīng)轉(zhuǎn)錄、翻譯、修

5、飾后形成a肽鏈,每三條a肽鏈相互結(jié)合擰成三條螺旋狀結(jié)構(gòu),成為前膠原,前膠原在細胞內(nèi)合成后被分泌到細胞外間隙形成不溶性膠原。膠原降解主要由膠原酶參與降解,它能在生理PH和溫度條件下特異性水解天然膠原蛋白三維螺旋結(jié)構(gòu),而不損傷其他蛋白質(zhì)和組織。
  Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RK IP)是磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白家族(phosphatidylethanolalmine-binding p

6、roteins,PEBPs)的成員之一,廣泛存在于不同種屬,參與多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)。RKIP是在信號通路Raf-1/MEK/ERK1,2中起負向調(diào)節(jié)作用的因子,但是RKIP過表達可以增強HSC的遷移能力Locostatin是一種無抗菌作用的黃惡唑酮衍生物,是RKIP的特異性抑制劑,可以顯著抑制HSC的遷移??梢赃x用肝星狀細胞株LX-2,研究TGF-β1刺激后Locostatin對HSC膠原代謝酶MMPs和TIMPs分泌的影響,以評估

7、Locostatin在肝纖維化治療中是否具有應(yīng)用的可能。
  目的:研究TGF-β1刺激后Locostatin對HSC膠原代謝酶MMPs和TIMPs分泌的影響,將就Locostatin是否可以促進肝纖維化的逆轉(zhuǎn)進行研究。
  方法:通過聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)分析TypeⅠ collagen、TypeⅢcollagen、TypeⅣ collagen、MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2、MMP-7及GAPDH

8、DNA的表達。運用酶聯(lián)免疫法(ELISA)分析TypeⅠ collagen、MMP-1、TIMP-1。通過western blot方法分析TypeⅠ collagen、MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2、MMP-7、MMP-9及GAPDH蛋白的表達
  結(jié)果:(1) western blot檢測Ⅰ型膠原蛋白的表達情況,與control組相比,Locostatin組Ⅰ型膠原蛋白的表達減少(1.377±0.032 vs

9、1.252±0.007),P<0.05,與control組相比,TGF-β1組及TGF-β1+Locostatin組均無差異。western blot檢測,與control組相比,MMP-1、TIMP-1在TGF-β1、TGF-β1+Locostatin、Locostatin組表達明顯增加。各組MMP-1/TIMP-1蛋白表達與control組相比無明顯差異。western blot檢測:與control組相比,TGF-β1組MMP-2

10、蛋白的表達明顯增加(1.102±0.002 vs1.123±0.002),P<0.05;與control組相比,TGF-β1、TGF-β1+Locostatin、locostatin組TIMP-2蛋白的表達明顯增加。TGF-β1+Locostatin MMP-2/TIMP-2與control組相比,蛋白的表達明顯降低(1.135±0.002 vs1.101±0.004),P<0.05; western blot檢測:與control組相

11、比,TGF-β1、TGF-β1+locostatin組MMP-7蛋白的表達明顯減少。western blot檢測:與control組相比,TGF-β1、TGF-β1+locostatin、locostatin組MMP-9蛋白的表達明顯減少。(2) RT-PCR結(jié)果顯示:Locostatin組Ⅰ型膠原mRNA的表達明顯減少(1.000±0.015 vs0.083±0.034),P<0.05;與control組相比,TGF-β1組及TGF-

12、β1+Locostatin組均無差異。RT-PCR檢測:與control組相比,TGF-β1組Ⅲ、Ⅳ型膠原mRNA的表達明顯增加;與control組相比,Locostatin組Ⅲ、Ⅳ型膠原mRNA的表達明顯減少,與control組相比,TGF-β1+Locostatin組無明顯差異。RT-PCR檢測,與control組相比,MMP-1、TIMP-1在TGF-β1、 TGF-β1+Locostatin、Locostatin組mRNA表達明

13、顯增加。各組MMP-1/TIMP-1表達與control組相比無明顯差異。RT-PCR檢測:與control組相比,TGF-β1組MMP-2 mRNA的表達明顯增加(0.976±0.034 vs1.094±0.002),P<0.05;與control組相比,TGF-β1、TGF-β1+Locostatin、locostatin組TIMP-2 mRNA的表達明顯增加。TGF-β1+Locostatin MMP-2/TIMP-2與contr

14、ol組相比,mRNA的表達明顯降低(0.9103±0.050 vs0.722±0.016)。(3)enzyme-linked immuno sorbent assay結(jié)果顯示,Locostatin組Ⅰ型膠原的表達減少(0.148±0.006 vs0.111±0.058),P<0.05,與control組相比,TGF-β1組及TGF-β1+Locostatin組均無差異。與control組相比,MMP-1、TIMP-1在TGF-β1、 T

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