IL-13對IL-13Ra2表達(dá)的調(diào)控及其與膠原蛋白生成的相關(guān)性.pdf

1、目的：據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新報(bào)道，纖維化疾病已經(jīng)成為分布全球的重大公共衛(wèi)生問題。近十年來，纖維化疾病的發(fā)病率和致死率呈現(xiàn)出顯著上升的趨勢，相關(guān)臨床病例持續(xù)增長。圍繞纖維化疾病的發(fā)病原因與機(jī)制的研究正日益成為科研人員關(guān)注的焦點(diǎn)，基于特異性表達(dá)受體或分子表面標(biāo)記的抗纖維化藥物研發(fā)受到科學(xué)界和醫(yī)藥企業(yè)的高度重視。研究表明，損傷修復(fù)、非可控性炎癥、腫瘤和動(dòng)脈粥樣硬化等多種疾病都可出現(xiàn)纖維化的表現(xiàn)。而IL-13是纖維化過程中促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的主要來源

2、--膠原蛋白生成的主要細(xì)胞因子之一。IL-13有兩種不同的受體：IL-13Rα1和IL-13Rα2。IL-13Rα1單獨(dú)存在時(shí)與IL-13的結(jié)合力很低，只在與協(xié)同性因子IL-4Rα結(jié)合形成受體復(fù)合物時(shí)才能有效傳遞IL-13的信號并發(fā)揮其生物學(xué)功能。IL-13Rα2與IL-13的親和力是IL-13Rα1的約5，000倍，由于其胞內(nèi)區(qū)很短目前認(rèn)為它可能不具有信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的功能。IL-13Rα2有三種表型：包括胞內(nèi)型、膜表面型和可溶型，三者的轉(zhuǎn)換

3、機(jī)制目前仍不清楚，其對IL-13依賴的膠原蛋白生成以及纖維化疾病的作用還存有爭議。本文旨在通過對IL-13刺激人肺成纖維細(xì)胞和肝星狀細(xì)胞后增殖、遷移和膠原蛋白生成情況的檢測與分析，探討IL-13對IL-13Rα2表達(dá)的調(diào)控及其與膠原蛋白生成的相關(guān)性，為臨床纖維化疾病的診治提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論參考。
　　 方法：①以IL-13不同濃度刺激人肝星狀細(xì)胞LX-2和人肺成纖維細(xì)胞HFL1，構(gòu)建纖維化體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停虎贛TT法和Trans

4、well技術(shù)觀察IL-13對細(xì)胞增殖和遷移能力的影響；③RT-PCR和ELISA檢測IL-4Rα、IL-13Rα1和胞內(nèi)型、可溶型IL-13Rα2表達(dá)；④免疫細(xì)胞化學(xué)(熒光法)胞內(nèi)型、膜表面型IL-13Rα2表達(dá)與定位；⑤RT-PCR檢測Ⅰ型膠原蛋白mRNA表達(dá)；⑥羥脯氨酸法(消化法)細(xì)胞培養(yǎng)上清液總膠原含量分析。
　　 結(jié)果：⑴IL-13能促進(jìn)肝星狀細(xì)胞LX-2的增殖、遷移、Ⅰ型膠原蛋白mRNA的表達(dá)以及總膠原蛋白含量增加，且

5、表現(xiàn)出較為明顯的劑量依賴方式；⑵正常情況下肝星狀細(xì)胞即能表達(dá)IL-4Rα和IL-13Rα1，而IL-13對兩者的表達(dá)水平?jīng)]有影響；⑶正常肝星狀細(xì)胞LX-2不表達(dá)IL-13Rα2，IL-13刺激后不能介導(dǎo)或上調(diào)其表達(dá)。⑷與對照組相比，低濃度范圍內(nèi)(5～20 ng/ml)的IL-13對肺成纖維細(xì)胞HFL1增殖、遷移、Ⅰ型膠原蛋白mRNA表達(dá)和總膠原蛋白含量沒有顯著影響；⑸高濃度IL-13(50，100 ng/ml)能以劑量依賴的方式顯著促進(jìn)

6、肺成纖維細(xì)胞HFL1的增殖、遷移、Ⅰ型膠原蛋白mRNA表達(dá)和總膠原蛋白含量的增加；⑹IL-13不改變肺成纖維細(xì)胞LX-2的IL-13Rα1和IL-4Rα表達(dá)水平；⑺未加IL-13刺激的正常肺成纖維細(xì)胞不表達(dá)IL-13Rα2；IL-13在低濃度范圍(5～20 ng/ml)內(nèi)能上調(diào)IL-13Rα2的表達(dá)；高劑量的IL-13對IL-13Rα2表達(dá)的上調(diào)作用減弱(IL-13:50 ng/ml)甚至消失(IL-13:100 ng/ml)；細(xì)胞內(nèi)的

7、IL-13Rα2主要分布于近細(xì)胞核的中央?yún)^(qū)，膜表面IL-13Rα2的表達(dá)很少，可溶型IL-13Rα2的含量約為胞內(nèi)型IL-13Rα2的1/2～2/3。
　　 結(jié)論：IL-13能促進(jìn)人肝星狀細(xì)胞和肺成纖維細(xì)胞的增殖、遷移和膠原蛋白生成(不改變IL-13Rα1和II-4Rα的表達(dá)水平)，但其作用受IL-13Rα2表達(dá)的影響。當(dāng)IL-13Rα2表達(dá)缺失時(shí)，IL-13促纖維化的效應(yīng)顯著且呈劑量依賴性：而當(dāng)IL-13Rα2表達(dá)上調(diào)時(shí)，IL