CD4OL基因和尿嘧啶核苷磷酸化酶基因的抗腫瘤機(jī)制的研究.pdf

1、卵巢癌是婦科最常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，具有惡性程度高，早期不易發(fā)現(xiàn)，易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)。雖然卵巢癌的治療手段如手術(shù)切除、放射治療和化學(xué)治療等常規(guī)治療方法均有一定程度的進(jìn)展，但其高復(fù)發(fā)率和容易轉(zhuǎn)移等問(wèn)題仍不能解決，致使5年生存率始終維持在30％左右，嚴(yán)重威脅著廣大婦女的生命健康。雖然經(jīng)根治性手術(shù)治療或手術(shù)后輔助放化療在一定程度上減少了卵巢癌的復(fù)發(fā)，但殘余病灶的存在往往增加了化療的負(fù)擔(dān)和復(fù)發(fā)的幾率，尤其是廣泛腹腔播散的晚期卵巢癌患者，預(yù)后極差。因

2、此，作為對(duì)傳統(tǒng)療方法的補(bǔ)充，用以改善晚期和復(fù)發(fā)患者預(yù)后的新療法的研究勢(shì)在必行。許多研究提示，對(duì)于殘余癌灶較少的患者，在手術(shù)后經(jīng)輔助化療，再用基因修飾的腫瘤細(xì)胞作為腫瘤疫苗進(jìn)行免疫生物治療，或采用腫瘤的抑癌基因等治療策略對(duì)于改善患者預(yù)后，降低復(fù)發(fā)率具有潛在的良好的應(yīng)用前景。因此，探索腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移抑制劑、分化誘導(dǎo)劑、放化療增敏劑，基因治療、干細(xì)胞治療、免疫生物治療等卵巢癌的新療法非常迫切。 目前，手術(shù)、化療和放療仍是卵巢癌的主

3、要治療手段，但是都存在一定的局限性。腫瘤的免疫基因治療不僅能提高宿主的免疫能力和特異性殺傷腫瘤細(xì)胞的能力，而且對(duì)正常組織細(xì)胞有較少的毒副作用，因此，越來(lái)越受到人們的重視。近年來(lái)，隨著基因轉(zhuǎn)移技術(shù)的進(jìn)展和人們對(duì)淋巴細(xì)胞激活途徑的進(jìn)一步認(rèn)識(shí)，采用細(xì)胞因子基因或其它外源性基因治療腫瘤成為備受關(guān)注的腫瘤治療策略之一。外源性免疫相關(guān)基因在腫瘤細(xì)胞的表達(dá)可通過(guò)提高宿主的免疫反應(yīng)產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)，尤其是細(xì)胞因子基因可促使靜止期T細(xì)胞分化成輔助性T細(xì)胞(

4、Th)，從而有效激活T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)。研究表明，可采用病毒和非病毒載體將基因轉(zhuǎn)染到卵巢癌等不同的細(xì)胞中，用于基因治療研究。病毒載體包括腺病毒、腺相關(guān)病毒、重組腺病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒、單純性皰疹病毒、細(xì)小病毒載體等；非病毒載體包括以質(zhì)粒等為基礎(chǔ)的載體發(fā)送。雖然有報(bào)道提出，腺病毒本身的纖維結(jié)構(gòu)可誘發(fā)非特異性免疫刺激而限制了它的臨床應(yīng)用，但是，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和早期臨床實(shí)驗(yàn)均未發(fā)現(xiàn)有明顯的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞免疫介導(dǎo)的限制體內(nèi)轉(zhuǎn)基因的表達(dá)和應(yīng)用。此外，

5、載體為腫瘤細(xì)胞或負(fù)載腫瘤抗原的DC時(shí)，在表達(dá)外源性基因的同時(shí)還可提供特異性抗原，誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)。 CD40是Koho于1984年在人的膀胱癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞表面分子，是一種糖基化的Ⅰ型跨膜糖蛋白，屬于腫瘤壞死因子受體超家族成員。經(jīng)研究證實(shí)，CD40表達(dá)于多種正常細(xì)胞，如B細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、造血前體細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞等；在多數(shù)腫瘤細(xì)胞中也呈高表達(dá)狀態(tài)，如肺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、

6、結(jié)腸癌、腎癌細(xì)胞等。作為CD40配體的CD40L主要表達(dá)于活化的CD4+T細(xì)胞表面，在活化的CD8+T細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞表面也有表達(dá)，屬TNFR超家族成員。CD40L由261個(gè)氨基酸組成，分子量39KDa，是Ⅱ型跨膜糖蛋白，它的細(xì)胞外功能區(qū)與TNF有許多氨基酸同源性，也被認(rèn)為是TNF超家族成員之一。 大量的研究結(jié)果表明，CD40與CD40L的相互作用是特異性免疫應(yīng)答及其調(diào)控過(guò)

7、程中重要的共刺激信號(hào)，而且在炎癥、自身免疫病、移植免疫和血液系統(tǒng)腫瘤等病理過(guò)程及疾病的治療中有重要的作用。CD40-CD40L連接反應(yīng)與T細(xì)胞對(duì)抗原的識(shí)別、IL-12等細(xì)胞因子的分泌、Th1免疫反應(yīng)、前炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生有重要作用，并有利于T細(xì)胞與抗原提呈細(xì)胞相互作用所需共刺激分子如CD86等的表達(dá)。目前已經(jīng)證實(shí)，多種惡性腫瘤細(xì)胞有CD40的表達(dá)，但CD40的信號(hào)激發(fā)在腫瘤生物學(xué)中的作用尚存在不同看法。CD40與腫瘤血管形成有關(guān)，可促進(jìn)

8、腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)；CD40信號(hào)激發(fā)后可產(chǎn)生直接或間接的抗腫瘤作用。在乳腺癌、膀胱癌等上皮性腫瘤細(xì)胞及某些B細(xì)胞腫瘤中，CD40分子激發(fā)后，與CD40L相互作用可明顯抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。因此，CD40L是抗腫瘤免疫中一個(gè)重要的治療靶點(diǎn)。 腫瘤的系統(tǒng)免疫應(yīng)答需要許多步驟，其中抗原遞呈過(guò)程是免疫應(yīng)答過(guò)程中的重要步驟之一。樹(shù)突狀細(xì)胞(dendriticcell，DC)是專職抗原遞呈細(xì)胞，它能把腫瘤抗原遞呈給T細(xì)胞，產(chǎn)生特

9、異性細(xì)胞免疫反應(yīng)，并可避免產(chǎn)生免疫耐受。體內(nèi)大部分的DC處于非成熟狀態(tài)，表達(dá)低水平的共刺激分子和粘附分子，在體內(nèi)外激發(fā)同種混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的能力較低，但具有極強(qiáng)的抗原吞噬能力。不成熟的DC在攝取腫瘤抗原后，必須被活化信號(hào)激活變成成熟DC才能將抗原提呈抗原給T細(xì)胞，而這一活化過(guò)程需要一系列刺激信號(hào)，如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、脂多糖(LPS)等。用抗CD40抗體和可溶性CD40L可激活CD40介導(dǎo)的信號(hào)通路，從而激活DC并使之成熟，

10、成熟DC分泌一系列細(xì)胞因子，如白介素(IL)-12、IL-6、IL-8、TNF-α和VEGF等，這些細(xì)胞因子又可促進(jìn)靜止T細(xì)胞分化成T輔助細(xì)胞(Th)。因此，DC上的CD40/CD40L連接反應(yīng)是發(fā)動(dòng)細(xì)胞免疫反應(yīng)的初始過(guò)程。 有研究證實(shí)，非淋巴組織中CD40L基因的表達(dá)也可激活機(jī)體的系統(tǒng)免疫反應(yīng)。Noguchi等研究證實(shí)，將CD40L基因?qū)敕伟┙M織可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗腫瘤免疫反應(yīng)。CD40L基因治療已應(yīng)用于臨床治療慢性淋巴細(xì)胞白血

11、病。對(duì)CD40L介導(dǎo)的抗腫瘤免疫反應(yīng)機(jī)制研究結(jié)果顯示，CD40L可通過(guò)與CD40的特異性結(jié)合反應(yīng)激活DC，進(jìn)一步增強(qiáng)CTL的活性，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫原性，克服腫瘤細(xì)胞對(duì)CD4+和CD8+的免疫耐受，從而增強(qiáng)抗腫瘤免疫。但是，CD40L基因的抗腫瘤效果和作用機(jī)制，如誘導(dǎo)DC對(duì)抗原提呈功能的影響，對(duì)T細(xì)胞免疫功能和細(xì)胞因子如IL-12、IL-23、IL-27分泌等的影響仍不十分清楚。綜上所述，探討CD40L基因及其瘤苗在卵巢癌治療中的效果及