PAI-1和vWF在幼鼠以及兒童青少年MS中的表達(dá)與意義的研究.pdf

1、一、代謝綜合征幼鼠模型的建立及血管內(nèi)皮功能損傷的檢測
　　目的：通過高脂高鹽飲食建立代謝綜合征(metabolicsyndrome，MS)幼鼠模型，觀察MS幼鼠腹主動(dòng)脈的病理變化，并檢測血管內(nèi)皮功能損傷標(biāo)記物-纖溶酶原激活物抑制物-1(plasminogenactivatorinhibitor-1，PAI-1)、血管性血友病因子(vonWillebrandFactor，vWF)在MS幼鼠腹主動(dòng)脈血管壁以及血清中的表達(dá)變化，探討MS

2、幼鼠PAI-1和vWF在血管內(nèi)皮功能損傷(endothelialcelldysfunction，ECD)發(fā)生中的作用和意義。
　　方法：3周SD幼鼠36只，隨機(jī)分為三組，分別給予高脂高鹽飲食、高脂飲食、普通飲食，飼養(yǎng)4周，普通飲食組(NC組)、高脂飲食組(FC組)及高脂高鹽飲食組(FSC組)每組12只。生長至7周末，分別測量體重、體長、腹圍、血壓，禁食12h后取尾靜脈血檢測血總膽固醇(Cholesterol，TC)、甘油三酯(Tr

3、iglyceride，TG)、高密度脂蛋白(High-densitylipoprotein，HDL)、空腹血糖(Fastingbloodglucose，F(xiàn)PG)及空腹胰島素(Fastinginsulin，F(xiàn)INS)水平，處死動(dòng)物后取腎周內(nèi)臟脂肪測內(nèi)臟脂肪重量，計(jì)算三組之間各指標(biāo)是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以確定MS幼鼠模型是否建立成功。模型建立成功后，取幼鼠的腹主動(dòng)脈，以HE染色法觀察三組動(dòng)物腹主動(dòng)脈的病理改變有無差別，采用免疫組化法檢測PAI

4、-1、vWF在三組動(dòng)物腹主動(dòng)脈血管壁的表達(dá)以及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)檢測三組動(dòng)物血清中PAI-1、vWF的含量，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，比較PAI-1、vWf在三組動(dòng)物中的表達(dá)是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以驗(yàn)證MS幼鼠是否合并ECD。
　　結(jié)果：1.FSC組幼鼠體重、腹圍、內(nèi)臟脂肪重量顯著高于NC組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，收縮壓(SystolicBloodPr

5、sssure，SBP)、舒張壓(DiastolicBloodPressure，DBP)、TG、TC水平均顯著高于NC組，HDL水平顯著低于NC組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，F(xiàn)PG、FINS與NC組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，F(xiàn)SC組幼鼠具備了兒童青少年MS的特征。2.FC組體重、腹圍、內(nèi)臟脂肪重量、FPG、FINS與NC組相比差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而血壓、血脂指標(biāo)與NC組比較不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.

6、05)，因而FC組幼鼠只有肥胖、糖代謝異常，不符合MS的診斷標(biāo)準(zhǔn)。3.腹主動(dòng)脈光鏡檢查顯示：NC、FC組大鼠腹主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)正常，血管壁結(jié)構(gòu)較完整，而FSC組大鼠腹主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞少許脫落，肌層細(xì)胞排列紊亂。4.PAI-1、vWF在FSC組大鼠腹主動(dòng)脈血管壁的免疫組化染色表達(dá)明顯高于NC、FC組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5.FSC組血清中PAI-1、vWF含量明顯高于NC、FC組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

7、>　　結(jié)論：1.3周齡SD幼鼠給予高脂高鹽飲食4周后，F(xiàn)SC組幼鼠出現(xiàn)了腹型肥胖、空腹血糖高、高血壓、高TG、低HDL等特征，這些改變與兒童青少年MS的臨床特征相似，說明通過高脂高鹽飲食成功建立了MS幼鼠模型。FC組雖然出現(xiàn)了腹型肥胖、糖代謝異常，但是無高血壓、脂質(zhì)代謝紊亂等特征，不符合MS的診斷標(biāo)準(zhǔn)。2.PAI-1、vWF在FSC組幼鼠腹主動(dòng)脈血管壁以及血清中的表達(dá)均高于FC組及NC組，說明MS幼鼠已有ECD，而FC組中的PAI-1、

8、vWF在腹主動(dòng)脈血管壁以及血清中的表達(dá)與NC組相比未見明顯差異，表明單純性肥胖幼鼠可能尚未出現(xiàn)ECD。
　　二、代謝綜合征兒童青少年血PAI-1、vwF與代謝紊亂關(guān)系的研究
　　目的：通過檢測血管內(nèi)皮功能損傷標(biāo)志物-PAI-1及vWF在肥胖及MS兒童青少年血清中的表達(dá)，探討兒童青少年MS與ECD的關(guān)系。方法：收集2011年2月-2012年2月期間于天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院兒科內(nèi)分泌門診就診的肥胖兒童病例共60例，其中單純性肥胖30

9、例，包括男16例，女14例，診斷為MS的30例，包括男17例，女13例，并隨機(jī)抽取同年齡健康查體的正常對照兒童30例，包括男15例，女15例。測量身高(H)、體重(W)、腰圍、臀圍、血壓，計(jì)算體質(zhì)指數(shù)(BMI)，檢測血總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、超敏CRP(hsCRP)、糖化血紅蛋白(HbAlc)以及進(jìn)行糖耐量實(shí)驗(yàn)(OGTT)。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定所有受試者空腹靜脈

10、血血清PAI-1、vWF的水平。比較三組之間各指標(biāo)的水平，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對MS組血清PAI-1水平與體格測量參數(shù)及糖脂代謝各指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)分析。結(jié)果：1.MS組的PAI-1及VWF水平顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2.單純性肥胖組血清PAI-1水平顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.003)，血清vWF與對照組比較差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.556)。3.相關(guān)性分析顯示PAI-1濃度與體重、BMI、腰圍、TC、

11、TG、LDL、FPG、FINS、SBP、DBP、hsCRP呈正相關(guān)(P<0.05)，與HDL呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與臀圍、腰臀比、HbAle、2hPG無相關(guān)性(P>0.05)，進(jìn)一步多元逐步回歸分析顯示FINS、TC、TG可獨(dú)立影響PAI-1的濃度。結(jié)論：1.兒童青少年MS合并ECD。PAI-1及vWF可以作為臨床中預(yù)測早期血管改變的指標(biāo)。2.兒童青少年MS存在的ECD可能與肥胖、血脂、血糖、血壓均相關(guān)，而FINS、TC、TG可能是