中成藥及保健品非法添加化學(xué)藥品的檢測方法學(xué)研究.pdf

1、一、目的: 針對目前市場上抗風(fēng)濕鎮(zhèn)痛類與鎮(zhèn)咳平喘類中成藥及保健品中非法添加的化學(xué)藥品進(jìn)行檢測方法學(xué)研究，選擇常見的14種激素類、10種解熱鎮(zhèn)痛類、10種鎮(zhèn)咳平喘類化學(xué)成分，建立快速、簡便的TLC、HPLC-DAD快檢初篩方法，用于基層單位的快速篩查，建立HPLC-MS-MS檢測方法，用于陽性樣品的結(jié)果確證。為有效打擊中成藥及保健品中非法添加化學(xué)藥物的不法行為提供技術(shù)依據(jù)。 二、方法: 1.TLC方法 1.

2、1激素類： 色譜條件：薄層板：快檢專用板，展開劑：[H-003]（藥品檢驗(yàn)專用展開劑）；檢視方法：噴以堿性四氮唑藍(lán)試液顯色，日光下檢視 1.2解熱鎮(zhèn)痛類 色譜條件：薄層板：快檢專用板，展開劑：[H-042]（藥品檢驗(yàn)專用展開劑，）；檢視方法：紫外燈254nm、365nm下、日光下、噴以1％高錳酸鉀的稀硫酸溶液，120℃加熱20min后在紫外燈365nm下、碘熏蒸等 1.3鎮(zhèn)咳平喘類 色譜條件：薄層

3、板：快檢專用板，展開劑：[H-012]、[H-022]（藥品檢驗(yàn)專用展開劑）；檢視方法：紫外燈254nm、365nm、日光下、碘熏蒸、噴以茚三酮試液，105℃加熱顯色、噴以稀碘化鉍鉀試液等 2.HPLC-DAD方法 2.1激素類 色譜條件：色譜柱： SHIMADZU Shim-packVP-ODS（250mm×4.6mm，5μm）C18色譜柱（以下同），A、B兩組流動相：水：乙腈梯度洗脫，柱溫：30℃，流速：1.

4、0ml·min-1，DAD檢測器（200nm～400nm），檢測波長240nm，進(jìn)樣量：20μl。 2.2解熱鎮(zhèn)痛類 色譜條件：A組：流動相A：10mmol·L-1醋酸銨溶液B：乙腈，梯度洗脫，柱溫：30℃，流速：1.0ml·min-1，DAD檢測器（200nm～400nm），檢測波長280nm，進(jìn)樣量：20μl。B組：流動相：20mmol·L-1醋酸鈉溶液（冰醋酸調(diào)pH5.0）-乙腈（60：40）柱溫：30℃，流速：1

5、.0ml·min-1，DAD檢測器（200nm～400nm），檢測波長230nm，進(jìn)樣量：20μl。 2.3鎮(zhèn)咳平喘類 色譜條件：A組：流動相A：10mmol·L-1醋酸銨溶液B：乙腈，梯度洗脫，柱溫：30℃，流速：1.0ml·min-1，DAD檢測器（200nm～400nm），檢測波長230nm，進(jìn)樣量：20μl。B組：流動相：0.1mol·L-1磷酸溶液-乙腈（96：4）柱溫：30℃，流速：1.0ml·min-1，D

6、AD檢測器（200nm～400nm），檢測波長207nm，進(jìn)樣量：20μl。 3.HPLC-MS-MS方法 3.1激素類 3.1.1色譜條件：色譜柱： SHIMADZU Shim-pack VP-ODS（250mm×4.6mm，5μm）C18色譜柱（以下同），流動相：A：20mmol·L-1醋酸銨溶液（含0.1％甲酸，V/V），B：乙腈（A、B兩組梯度洗脫程序同2.1），柱溫：室溫，流速：1.0ml·min-1（

7、分流比4：1），進(jìn)樣量：20μl。 3.1.2質(zhì)譜條件：電噴霧離子化正離子檢測方式（ESI+），全掃描一級質(zhì)譜、選擇離子二級掃描質(zhì)譜檢測方式，離子源溫度：120℃，去溶劑氣溫度：400℃，毛細(xì)管電壓：3.00kv，錐孔電壓：15v，萃取電壓：3v，去溶劑氣流速：750L·h-1，錐孔反吹氣流速：50L·h-1。 3.2解熱鎮(zhèn)痛類 3.2.1色譜條件：流動相A：20mmol.L-1醋酸銨溶液，B：乙腈（梯度洗脫程序

8、同2.2解熱鎮(zhèn)痛類A組）柱溫：30℃，流速：1.0ml·min-1（分流比4：1），進(jìn)樣量：20μl。 3.2.2質(zhì)譜條件：電噴霧離子化正、負(fù)離子檢測方式（ESI+、ESI-），全掃描一級質(zhì)譜、選擇離子二級掃描質(zhì)譜檢測方式，離子源溫度：120℃，去溶劑氣溫度：400℃，毛細(xì)管電壓：3.00kv，錐孔電壓：15v，萃取電壓：3v，去溶劑氣流速：750L·h-1，錐孔反吹氣流速：50L·h-1。 3.3鎮(zhèn)咳平喘類 3

9、.3.1色譜條件：流動相A：20mmol·L-1醋酸銨溶液（含0.1％甲酸，V/V）B：乙腈（梯度洗脫程序同2.3鎮(zhèn)咳平喘類A組）柱溫：30℃，流速：1.0ml·min-1（分流比4：1），進(jìn)樣量：20μl。 3.3.2質(zhì)譜條件：電噴霧離子化正離子檢測方式（ESI+），全掃描一級質(zhì)譜、選擇離子二級掃描質(zhì)譜檢測方式，離子源溫度：120℃，去溶劑氣溫度：400℃，毛細(xì)管電壓：3.00kv，錐孔電壓：15v，萃取電壓：3v，去溶劑氣流

10、速：750L·h-1，錐孔反吹氣流速50L·h-1。 三、結(jié)果: 應(yīng)用上述方法對市場抽驗(yàn)的50種抗風(fēng)濕鎮(zhèn)痛類與鎮(zhèn)咳平喘類中成藥及保健品進(jìn)行檢測，檢出：7種樣品中含有解熱鎮(zhèn)痛類和激素類化學(xué)成分，采用HPLC-MS-MS的法建立了34種對照品的標(biāo)準(zhǔn)譜庫信息，由于TLC法的靈敏度較低，且輔料等干擾，發(fā)現(xiàn)TLC方法檢出結(jié)果中出現(xiàn)一些假陽性，另外有些成分未被檢出，HPLC-DAD方法中一種激素類成分的誤判，另檢出一種樣品中含有TL