影響山羊活體采卵與體外受精效果的研究.pdf

1、本實驗針對如何提高腹腔鏡進行山羊活體采卵和體外受精效果開展了多方面的研究，以便完善“活體采卵一體外受精”生產(chǎn)體外胚胎的技術(shù)體系，進而提高體外胚胎生產(chǎn)的效率。 用屠宰廠采集的卵巢作為實驗材料，比較不同型號的采卵針對卵母細胞回收效果的影響，結(jié)果表明采卵針型號對卵母細胞回收率和可用率均有較大影響。9號和12號針的回收率分別為66．78％和62.41％顯著高于7號針的52.63％(P<0．05)；可用率分別為63．59％和68．82％也

2、顯著高于7號針的55％(P<0．05)。9號與12號針在卵母細胞回收率，可用率方面差異均不顯著(P>0．05)，說明這兩種型號的針較適宜作為山羊活體采卵用針。采用間隔兩周，重復(fù)三次的采卵方案，比較常規(guī)手術(shù)法與腹腔鏡法活體采卵(LOPU Laparoscopic Ovum Pick-up)對活體采卵效果及供試羊生殖器官．損傷的影響。結(jié)果表明常規(guī)手術(shù)法采卵與LOPU在卵母細胞回收率(76．47％對74．81％)及可用率(75．24．％對72

3、.45％)方面差異不顯著(P>0．05)。但常規(guī)手術(shù)法對供試羊的生殖器官損傷較大，第三次采卵時全部發(fā)生粘連，對采卵操作產(chǎn)生了較大影響。將供試羊分為三組，重復(fù)三次LOPU，比較不同采卵間隔時間對活體采卵效果及供試羊生殖器官損傷情況的影響，結(jié)果間隔一周的每次每只卵泡數(shù)(12.08個)、每次每只獲卵數(shù)(8．75個)，均顯著低于間隔兩周(15．58個，11．97個)和三周組(14．92個、11．42個)(P<0．05)。卵母細胞回收率(分別為7

4、2.4．1％、76．47％、78．29％)與可用卵率(分別為74．28％、75．24％、74．45％)三組間無顯著差異(P>0．05)。間隔一周重復(fù)活體采卵對卵巢的損傷較大，卵巢表面有較多的血斑；間隔2周組卵巢基本能夠恢復(fù)正常，但卵巢表面也有少量的血斑；間隔3周組卵巢能夠恢復(fù)正常。綜合考慮活體采卵的間隔時間以兩周為宜。 山羊體外受精研究的結(jié)果表明：成熟液中添加10～60ng/mlEGF各組的極體率(90．67～88．46％)與未

5、添加組(75．68％)相比較，均有顯著提高(P<0．05)，尤以添加20ng/ml的極體率最高(92.86％)，但添加EGF的各組之間極體率無顯著差異。成熟液中添加EGF明顯提高了卵母細胞受精后的發(fā)育能力。發(fā)情綿羊血清可以替代發(fā)情山羊血清作為山羊精子的獲能物質(zhì)，卵裂率達60．42％；受精液中添加5％、10％、20％發(fā)情羊血清的三組卵裂率分別為58．33％、59．72％和62.50％，顯著高于而不含發(fā)情羊血清組(0％，P<0．01)。受精

6、液中添加10 μg/ml和20 μg/ml肝素組的卵裂率分別為87．69％和85．71％(P>0．05)，兩組間無顯著差異，但這兩組的卵裂率均極顯著地高于不含肝素組(59．02％，P<0．01)。發(fā)育液中添加1％EAA組的囊胚率顯著地高于添加2％EAA組(29．17％VSl7．10％，P<0．05)。5％CO<,2>的空氣與混合氣(5％CO<,2>+5％O<,2>+90％N<,2>)的桑椹胚率無顯著差異(P>0．05)，但混合氣的囊胚率

7、為30．16％，顯著高于5％CO<,2>的空氣的16．27％(P<0．05)，說明低氧條件(混合氣)對囊胚的形成有促進作用。發(fā)育液中添加5～40ng/ml的EGF各組與對照組(不含EGF組)相比較，囊胚率均有顯著提高(P<0．05)，但添加80ng/mlEGF組的囊胚率急劇下降到了5.50％，顯著低于對照組(1.5.29％，P<0.05)，極顯著地低于添加5～40ng/mlEGF的各組(28.75％、32.76％、31.25％、26.7