?；铙w采卵及體外受精技術(shù)的研究.pdf

1、隨著胚胎工程技術(shù)的推廣應(yīng)用，?；铙w采卵及體外受精技術(shù)成為解決體外生產(chǎn)胚胎緊缺的有效途徑。本研究對(duì)牛的活體采卵、卵母細(xì)胞體外成熟、體外受精及早期胚胎體外發(fā)育作了系統(tǒng)研究，研究結(jié)果如下： 1從屠宰場(chǎng)獲取的卵巢1597對(duì)，抽吸法簡(jiǎn)便、快速，平均每對(duì)11.4枚卵母細(xì)胞。2活體采卵獲得的卵母細(xì)胞從數(shù)量(4.08枚/頭)、形態(tài)以及后期的發(fā)育情況均顯著(p＜0.05)低于屠宰場(chǎng)卵巢獲得的卵子；不同個(gè)體采集卵子數(shù)量差異顯著(p＜0.05)；活體

2、采卵3天前用FSH100IU處理，可提高采卵數(shù)量，差異顯著(10枚/頭與4.6枚/頭)(p＜0.05)。 3用不同溫度(4℃，20～25℃和30～35℃)的生理鹽水收集卵巢，結(jié)果表明30～35℃保存的成熟率和卵裂率最高，卵巢保存時(shí)間以6h內(nèi)為好，一般不超過(guò)10h。用卵母細(xì)胞進(jìn)行保存運(yùn)輸，卵母細(xì)胞的耐受性低于卵巢，后期發(fā)育有影響，但在長(zhǎng)途運(yùn)輸超過(guò)10h以上，可以做為一種解決方法。 4成熟培養(yǎng)液添加第2天發(fā)情牛血清(D2OC

3、S)，成熟率、卵裂率(80.2％、75.3％)，獲得與胎牛血清(FBS)相近的成熟率、卵裂率(78.9％、76.0％)差異不顯著(p＞0.05)。 5成熟培養(yǎng)液中添加10％的牛卵泡液(bFF)對(duì)牛卵母細(xì)胞的體外成熟有促進(jìn)作用，但高濃度的bFF(20％，30％)則抑制牛卵母細(xì)胞的體外成熟。 6用分離性控精子進(jìn)行體外受精比用正常精子卵裂率(16.7％與73.7％)極顯著降低(P＜0.01)，但受精卵的囊胚發(fā)育率(34.1％與

4、35.8％)無(wú)顯著差異(p＞0.05)，孵育率(41.7％與66.7％)顯著降低(P＜0.05)。 7受精液中添加三種濃度咖啡因(5mmol/L，10mmol/L，15mmol/L)均優(yōu)于對(duì)照組，但差異不顯著(p＞0.05)，其中咖啡因濃度為10mmol/L，肝素濃度為20IU組合，效果較好。 8胚胎培養(yǎng)液中添加無(wú)游離脂肪酸的BSA對(duì)受精卵體外發(fā)育有一定的促進(jìn)作用，與對(duì)照組相比囊胚率(28.2％與26.3％)，囊胚孵育率

5、(71.1％與68.9％)差異不顯著(p＞0.05)，囊胚在形態(tài)及細(xì)胞團(tuán)緊密度上優(yōu)于對(duì)照組，無(wú)游離脂肪酸的BSA可提高體外胚胎質(zhì)量。 9用三氣(5％CO2+5％O2+90％N2)培養(yǎng)受精卵，可以顯著提高囊胚率(34.1％與26.3％)及囊胚孵育率(75.2％與66.7％)(P＜0.05)，胚胎形態(tài)和質(zhì)量也優(yōu)于二氣(5％CO2+95％空氣)培養(yǎng)的囊胚質(zhì)量。 10培養(yǎng)液添加第7天發(fā)情牛血清有助于囊胚的發(fā)育率，顯著優(yōu)于添加第二

6、天發(fā)情牛血清的培養(yǎng)液結(jié)果(31.4％與21.6％)(p＜0.05)，但與添加胎牛血清的培養(yǎng)液(31.4％與26.6％)差異不顯著(p＞0.05)，第7天發(fā)情牛血清有利于受精卵的體外發(fā)育。11活體采卵法獲得的卵母細(xì)胞的卵裂率、囊胚率(70.5％、18.3％)明顯低于從屠宰場(chǎng)卵巢獲得卵子的卵裂率、囊胚率(75.1％、34.8％)(p＜0.05)。 研究結(jié)果表明，重復(fù)對(duì)母?；铙w采卵生產(chǎn)體外胚胎效果穩(wěn)定，進(jìn)一步優(yōu)化卵母細(xì)胞的體外成熟及培