實驗大鼠的體外受精技術研究.pdf

1、大鼠是生命科學研究中常用的實驗動物之一，大鼠體外受精技術的發(fā)展不僅有利于大鼠種質資源保存，而且還可推動受精分子機制、胚胎發(fā)育及生殖毒理等生殖生物學領域的深入研究，具有重要的實用價值和理論意義。本試驗主要以SD大鼠為研究對象，對其超數排卵、體外受精、胚胎體外培養(yǎng)及胚胎移植等技術進行探討，實驗內容和結果如下： 1．觀察了不同劑量水平的PMSG/hCG對幼齡大鼠的超數排卵效果。結果表明，4～5周齡組SD大鼠在激素劑量為20 IU/只時

2、，平均超排采卵54.6枚，明顯高于其他劑量組；6～7周齡組在激素劑量為40 IU/只時超排采卵數最多，為32.7枚，但與30 IU和50 IU劑量組差異不明顯；8～9周齡組超排效果最差，用不同劑量超排最高平均采卵21.5枚。本試驗表明，SD大鼠的超排效果隨著年齡增長而下降，4～5周齡雌鼠超排效果最好，其中激素劑量為20 IU/只時超排采卵數最多。 2．采用陰道涂片檢查的方法對大鼠發(fā)情周期的不同階段進行觀察，分析各個發(fā)情周期陰道上

3、皮細胞的變化情況。結果發(fā)現，發(fā)情周期的不同階段，陰道上皮細胞類型呈規(guī)律性變化：發(fā)情前期的陰道涂片以橢圓形的有核上皮細胞占絕大多數；發(fā)情期的陰道涂片以片狀的，角質化上皮細胞占絕大多數；發(fā)情后期的陰道涂片，片狀角質化上皮細胞、有核上皮細胞和白細胞同時存在，且比例相當；發(fā)情間期的陰道涂片以白細胞占絕大多數。 3．對大鼠進行胚胎移植研究，比較了自然排卵和超數排卵所得卵子的質量差異。結果顯示，經超排處理的2-細胞胚胎在移植給受體后，妊娠率

4、為63.3％，自然排卵組的妊娠率為60％，統(tǒng)計學差異不顯著。 4．選用mKRB、IVF30和mR1ECM-BSA作為精子獲能液和體外受精液，對SD大鼠進行體外受精。結果表明，用IVF30培養(yǎng)液對SD大鼠進行IVF可以獲得73.8％的2-細胞卵裂率，顯著高于mR1ECM-BSA組和mKRB組(分別為13.5％和21.1％)。 5．選定IVF30為精子獲能液和體外受精液，對影響體外受精的一些關鍵因素如精子獲能時間，注射hCG

5、后收集卵子的時間，以及精子與卵子的共孵育時間進行研究。結果發(fā)現，在IVF30培養(yǎng)液中，大鼠精子不經獲能也可以使卵子受精(受精率為33.8％)，但受精率在一定范圍內隨著獲能時間的延長呈上升趨勢，在獲能7 h時受精率最高，為83.2％，明顯高于其他各組，繼續(xù)獲能9 h后再與卵子相遇則受精率下降；注射hCG后13h收集卵子進行體外受精，受精率最高，為88.6％，繼續(xù)推遲采卵時間，則受精率下降；精卵相互作用6、9、12 h后的2-細胞卵裂分別為

6、70.9％、78.6％和73.8％，統(tǒng)計學差異不顯著； 6．主要研究了BSA、PVA及葡萄糖濃度對大鼠胚胎體外發(fā)育的影響。結果發(fā)現，BSA和PVA對受精卵至4-細胞期前的發(fā)育差異不顯著，但PVA的添加似乎更支持4-細胞期以后的胚胎發(fā)育，21.4％的胚胎能夠發(fā)育到囊胚，而BSA組則沒有胚胎發(fā)育到囊胚；不同濃度葡萄糖對大鼠受精卵體外培養(yǎng)的結果顯示，0.2mM組的囊胚發(fā)育率為僅為4.1％，顯著低于5.5 mM組和7.5 mM組(23.

7、5％和21.4％)，而5.5 mM組和7.5mM組的囊胚發(fā)育率不顯著。 7．用IVF30對更多品系大鼠進行體外受精試驗，并對體外受精所得2-細胞胚胎進行了體內移植。結果表明，IVF30不僅適合用作SD大鼠的精子獲能和體外受精液，在Wistar、GK和F344大鼠也可以獲得比較高的體外受精率(分別為72.6％、87.8％和71.6)，GK大鼠的體外受精率甚至高于SD大鼠(為83.2％)，但四個品系的體外受精率差異均不顯著；胚胎移植