內(nèi)毒素對豚鼠血迷路屏障通透性的影響及L-NAME的保護作用.pdf

1、目的：研究內(nèi)毒素對血迷路屏障形態(tài)和功能影響的動態(tài)變化及NO在內(nèi)毒素致血迷路屏障通透性改變過程中的可能作用，探討內(nèi)毒素對血迷路屏障通透性變化的部分機制，為研究化膿性中耳乳突炎致內(nèi)耳損害的機制提供理論依據(jù)。 方法： 選取耳廓反射正常，無中耳炎癥的健康雜色封閉群豚鼠135只，體重150-200g，隨機分為三組：生理鹽水組(NS組)、內(nèi)毒素組(ETX組)、NG-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)治療組。生理鹽水組：雙耳聽泡內(nèi)各

2、注入無菌生理鹽水200ul；內(nèi)毒素組：雙耳聽泡內(nèi)各注入濃度為5mg/ml的內(nèi)毒素200ul(內(nèi)含1mgETX)；L-NAME治療組：雙耳聽泡內(nèi)各注入濃度為5mg/ml的ETX和L-NAME200ul(內(nèi)含1mgETX和1mgL-NAME)。每組按12h、24h、72h三個時相點分組，各組取5只(10耳)在各時相點前2小時頸靜脈注射伊文思藍(EvansBlue,EB)，生理鹽水心臟灌注沖洗至右心耳流出淡紅色液體后，快速處死動物解剖出骨性耳

3、蝸，置于甲酰胺液內(nèi)，取浸出液檢測伊文思藍通過血迷路屏障的滲出量的動態(tài)變化。光鏡、電鏡觀察耳蝸形態(tài)變化，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測耳蝸組織中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的表達變化。用硝酸還原酶法檢測各組耳蝸組織一氧化氮(NO)含量的變化。 結(jié)果： 1.豚鼠耳蝸血迷路屏障通透性的變化 (1)生理鹽水組EB未通過耳蝸血迷路屏障。 (2)內(nèi)毒素能增加豚鼠血迷路屏障的通透性，使EB的滲出量明顯增加，且隨時間的變化而

4、變化。各時間組比較，24h明顯增加，與12h、72h比較，有極顯著性差異(P＜0.001)。 (3)L-NAME能減輕內(nèi)毒素引起的血迷路屏障通透性變化。與ETX組同一時間比較，24h、72h血迷路屏障的通透性均有極顯著性差異(P＜0.001)。 2.內(nèi)耳病理變化 (1)解剖顯微鏡觀察：NS組：整個觀察期中耳腔無分泌物。ETX組：12小時、72小時見中耳腔有少量粘性分泌物；24小時中耳腔內(nèi)有較多粘性分泌物。L-NA

5、ME治療組：12小時、72小時中耳腔有少許粘性分泌物，24小時較ETX組24小時分泌物減少。 (2)光鏡觀察：NS組：血管紋(StV)、螺旋韌帶(SL)、螺旋神經(jīng)節(jié)(SGC)、Corti器等細胞形狀規(guī)則、排列整齊、胞核大小均勻；血管紋、螺旋韌帶等毛細血管無充血，無出血。ETX組：12h、72h鼓階、前庭階內(nèi)可見少量炎性細胞浸潤，血管紋毛細血管充血，部分可見出血及少量炎性細胞浸潤；24小時鼓階、前庭階內(nèi)可見大量炎性細胞滲出，血管紋

6、毛細血管充血。L-NAME治療組：與ETX組相比，12小時差別不明顯；24小時血管紋充血較輕，螺旋韌帶內(nèi)炎性細胞較少；72小時見部分血管充血，SL偶見少量炎性細胞。 (3)超微結(jié)構(gòu)：NS組血管紋及螺旋韌帶結(jié)構(gòu)正常。ETX組血管紋及螺旋韌帶有不同程度的損害，表現(xiàn)在血管紋及螺旋韌帶有炎性細胞浸潤，毛細血管充血，血管內(nèi)皮細胞之間的間隙增寬，部分內(nèi)皮細胞膜結(jié)構(gòu)丟失，24h時還出現(xiàn)內(nèi)皮細胞連續(xù)性中斷。L-NAME治療組較ETX組明顯減輕，

7、各時間組未見內(nèi)皮細胞連續(xù)性中斷。 3.免疫組化 在NS組，耳蝸組織中未見有iNOS的陽性表達。ETX組和L-NAME治療組均可見iNOS的陽性表達，主要表達在血管紋、螺旋神經(jīng)節(jié)細胞。經(jīng)圖像分析測定各組切片的灰度值，結(jié)果示：ETX組在不同時間點表達存在明顯差異，其中，24hiNOS表達呈強陽性，與12h、72h比較，有顯著性差異(P＜0.05)。L-NAME治療組與ETX組比較，同一時間均有顯著性差異(P＜0.01)。

8、 4.耳蝸組織NO含量的測定：在ETX組，NO含量隨時間的變化而變化。24h與12h、72h比較，有顯著差異(P＜0.05)。同一時間不同組NO含量比較，ETX組明顯升高，與NS組比較，有極顯著性差異(P＜0.001)；與L-NAME治療組比較，有顯著性差異(P＜0.01)。L-NAME治療組與NS組比較，NO含量有所升高，同一時間比較，有顯著性差異(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.內(nèi)毒素注入聽泡后能引起豚鼠血迷路屏障