黃芪、丹參中多個有效成分的制備和質(zhì)量控制研究.pdf

1、黃芪和丹參均為傳統(tǒng)的常用中藥，現(xiàn)代藥理研究表明，黃芪在細胞培養(yǎng)、動物及人體內(nèi)均有一定的抗病毒作用，對抗體內(nèi)干擾素系統(tǒng)有明顯的刺激作用。黃芪的化學成分主要有三萜皂苷、黃酮類、多糖類、氨基酸和微量元素等，其中皂苷類物質(zhì)在抗炎、鎮(zhèn)痛、抗衰老、抗腫瘤及免疫增強等方面有顯著活性。丹參具有活血化瘀，調(diào)經(jīng)止痛，清熱安神等功效，在臨床上廣泛用于治療心血管系統(tǒng)疾病，其有效成分包括脂溶性的丹參酮類和水溶性的丹參素及丹酚酸類成分，水溶性成分主要為丹參素、原兒

2、茶醛、丹酚酸B等，具有抗血栓、改善血循環(huán)、抗氧化等作用；脂溶性成分主要為丹參酮ⅡA、隱丹參酮等，具有抗炎、抑制低密度脂蛋白氧化等活性。藥材中不同的化學成分有不同的藥理作用，中醫(yī)基礎(chǔ)理論講究辨證施治，注重藥材中多種成分的協(xié)同作用，認為中藥的多種成分通過多途徑，作用于多靶點、多環(huán)節(jié)，從而產(chǎn)生非線性的綜合療效，中藥作用機理的這一復雜性決定了必須控制其中具有不同藥效成分的含量，建立藥材中多種成分的含量測定方法，從而指導中醫(yī)臨床用藥。另外，隨著對

3、中藥成分、藥理研究的不斷深入和中藥分析技術(shù)的不斷進步，控制中藥中多種成分的含量已成為可能，建立中藥多指標成分的含量測定方法已成為全面控制中藥質(zhì)量的一種趨勢。但目前采用多指標成分含量測定控制中藥質(zhì)量的報道較少，其主要原因為多成分對照品的獲取比較困難，且中藥多成分含量測定的技術(shù)難度較大。 黃芪和丹參藥用歷史悠久，使用范圍廣泛，研究基礎(chǔ)較好，用于多成分含量測定方法研究中具有代表性，本論文選取黃芪和丹參兩味藥材為研究對象，分別對黃芪藥材

4、中的毛蕊異黃酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和黃芪皂苷Ⅳ、乙酰黃芪皂苷以及丹參藥材中兩種脂溶性成分丹參酮ⅡA、隱丹參酮和兩種水溶性成分迷迭香酸和丹酚酸B進行了提取分離和結(jié)構(gòu)鑒定，并對黃芪和丹參藥材的相關(guān)對照品的制備工藝進行了研究，在保證獲取高純度對照品的基礎(chǔ)上，分別建立了黃芪藥材的多指標成分的HPLC/MSD質(zhì)量控制方法和丹參藥材的多指標成分的HPLC/DAD質(zhì)量控制方法。在對黃芪、丹參藥材有效成分的分離鑒定及對

5、照品的制備工藝研究中，首先對黃芪、丹參兩味中藥活性部位的化學成分進行了系統(tǒng)研究，運用現(xiàn)代色譜分離技術(shù)共分離了11個化合物，采用理化鑒定和現(xiàn)代光譜分析方法，分別鑒定為黃芪中的毛蕊異黃酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪皂苷Ⅳ和乙酰黃芪皂苷，丹參中的丹參酮ⅡA、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、熊果酸、迷迭香酸和丹酚酸B。然后，在對兩味藥材分離的幾種單體定位準確的基礎(chǔ)上，進行了兩味藥材對照品的制備工藝研究，最后確定黃芪皂苷Ⅳ的制

6、備工藝，計算得率為0.15％；丹酚酸B的制備工藝得率為0.17％；迷迭香酸的制備工藝得率為0.08％，且純度均高于99.0％。結(jié)果表明此制備工藝完全合乎含量測定的要求，且能方便地制備各對照品，為藥材的多指標成分質(zhì)量控制奠定了基礎(chǔ)。 第二部分為黃芪、丹參藥材多指標成分的質(zhì)量控制研究。本部分包括黃芪藥材多指標成分的HPLC/MSD質(zhì)量控制研究和丹參藥材多指標成分的HPLC/DAD質(zhì)量控制研究。首先，建立了HPLC/MSD同時測定黃芪

7、藥材中黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪皂苷Ⅳ和乙酰黃芪皂苷含量的方法，以AgilentZorbaxSBC18(4.6mm×250mm，5μm)為色譜柱，流動相為乙腈-水，梯度洗脫，流速為1.0ml·min-1，進樣量為10μl。質(zhì)譜的優(yōu)化條件為：采用大氣壓電離-電噴霧電離(API-ESI)；檢測模式：負離子；干燥氣(N2)流速：7.01·min-1；霧化氣壓力：25psi；干燥氣溫度：350℃；裂解電壓：100V；毛細管電壓：3500V。對

8、其進行了方法學考察，結(jié)果表明：黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪皂苷Ⅳ和乙酰黃芪皂苷的線性范圍分別為：0.08960～14.34μg·ml-1(r=0.9999)，0.08240～3.296μg·ml-1(r=0.9997)，0.1052～4.208μg·ml-1(r=0.9998)，0.02050～3.280μg·ml-1(r=0.9998)；其精密度、穩(wěn)定性、重復性、檢測限及加樣回收率均符合要求。其次，建立了HPLC/DAD同時測定丹參中

9、迷迭香酸、丹酚酸B、隱丹參酮及丹參酮ⅡA含量的方法。色譜柱：AgilentZorbaxSBCl8(4.6mm×250mm，5μm)，流動相為2％的醋酸溶液-甲醇，梯度洗脫，檢測波長為281nm，流速為1.0ml·min-1，進樣量為20μl。對其進行了方法學考察，結(jié)果表明：迷迭香酸、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮ⅡA的線性范圍分別為：3.750～120.2μg·ml-1(r=0.9999)，34.20～1095μg·ml-1(r=0.999