六味地黃湯的質量控制及有效成分的藥代動力學研究.pdf

1、六味地黃湯是中醫(yī)滋陰補腎的經典名方，出自《小兒藥證直訣》，由熟地黃、山茱萸、山藥、澤瀉、茯苓、牡丹皮組成，其組方嚴謹，配伍得當，療效確切，在臨床上得到廣泛的應用。本文以六味地黃湯為研究對象，從六味地黃湯的質量控制以及有效成分在大鼠體內的藥代動力學兩方面進行研究：建立了六味地黃湯的指紋圖譜，并對其中五種有效成分的含量進行了同時測定，為六味地黃湯的質量控制提供了定性和定量的依據；多次i.g給予大鼠六味地黃湯，確定其吸收入血成分，同時建立了大

2、鼠血漿中莫諾苷和馬錢苷的測定方法，通過i.g給予大鼠六味地黃湯、三補湯、一補一瀉湯，測定莫諾苷和馬錢苷的血藥濃度，計算藥代動力學參數(shù)，探討有效成分在體內的動態(tài)變化規(guī)律，為臨床用藥提供科學依據。
　　 主要研究內容包括以下三個方面：
　　 一、六味地黃湯的質量控制研究
　　 建立了六味地黃湯的指紋圖譜和多種成分同時測定的HPLC法，并測定了六味地黃湯中多糖含量，為更好的控制六味地黃湯的內在質量提供了定性和定量的科學

3、依據。
　　 六味地黃湯的指紋圖譜中共得到19個共有峰，其中5個成分經對照品對照，鑒定為沒食子酸、莫諾苷、馬錢苷、芍藥苷和丹皮酚，并建立了5種成分含量測定的方法；通過與相同色譜條件下單味藥材色譜的比對，確定了六味地黃湯中19個共有峰的歸屬，主要來自于山茱萸、牡丹皮扣熟地黃藥材，其中2、8、12、14號峰為山茱萸藥材與牡丹皮藥材共有。
　　 本文通過不同配伍組中五種物質的含量的比較，對六味地黃湯煎煮過程成分溶出規(guī)律進行了初

4、步研究。莫諾苷、馬錢苷、芍藥苷、丹皮酚的含量在六味地黃湯全方組中為最高，其他配伍組均低于全方組，提示各味藥材的配伍能促進單味藥材中成分的溶出。牡丹皮中沒食子酸在單味藥材煎煮含量較低，在與除山茱萸藥材的其他配伍組中含量較高，在含有山茱萸的配伍組中含量則略有降低，提示其他藥味可促進牡丹皮中沒食子酸的溶出，而山茱萸藥材在一定程度上呈抑制作用。
　　 多糖成分也為六味地黃湯的有效成分，本文用蒽酮一硫酸法測定了六味地黃湯中多糖的含量。

5、r>　　 二、六味地黃湯不同配伍對血清入血成分的影響
　　 本文對六味地黃湯在大鼠體內吸收入血成分進行研究，確定了莫諾苷和馬錢苷為六味地黃湯i.g給藥后能以原型入血的成分，并建立了同時測定大鼠血清中莫諾苷和莫諾苷在0.254～102μg/ml的范圍內，峰面積與血清濃度之間呈良好的線性關系(r=0.9998)，日內和日間精密度的RSD％均小于15％；馬錢苷在0.579～232μg/ml的范圍內，峰面積與血清濃度間呈良好的線性關系

6、(r=0.9998)，日內和日間精密度的RSD％均小于15％，符合生物樣品的分析要求。
　　 本文選用6只大鼠為一組，累計多次灌胃給予大鼠六味地黃湯、一補一瀉湯、三補湯后，分別于1、2、3h取血清進行分析，測定莫諾苷和馬錢苷的血藥濃度，提示全方組對莫諾苷和馬錢苷的吸收有一定程度的促進作用。
　　 三、大鼠血漿中莫諾苷和馬錢苷的藥代動力學研究
　　 建立了大鼠血漿中同時測定莫諾苷和馬錢苷的HPLC定量分析方法。大鼠

7、血漿以甲醇沉淀蛋白去除雜質，N2氣吹干甲醇復溶后進樣，測定大鼠血漿中莫諾苷和馬錢苷的濃度，莫諾苷和馬錢苷分離度佳，內源性物質不干擾測定。莫諾苷濃度在0.01021～10.21μg/ml范圍內，峰面積與血漿濃度間呈良好的線性關系(r=1.000)，提取回收率大于70％，日內和日間精密度均小于5％；馬錢苷濃度在0.006325～6.325μg/ml內，峰面積與血漿濃度間呈良好的線性關系(r=1.000)，提取回收率大于80％，日內和日間精密

8、度均小于5％，此方法具有靈敏、專一的特點，符合生物樣品的分析要求。
　　 本文選用16只大鼠，以六味地黃湯、一補一瀉湯、三補湯分別單次灌胃(i.g.)給藥，其中六味地黃湯和三補湯大鼠血漿中莫諾苷和馬錢苷血藥濃度-時間曲線符合一級吸收的一室模型，而一補一瀉湯大鼠血漿中的莫諾苷和馬錢苷血藥濃度-時間曲線符合一級吸收的二室模型；通過藥代動力學參數(shù)的研究，進一步研究六味地黃湯的體內過程，為臨床應用提供更加科學的依據。
　　 對大