熊去氧膽酸膠囊的質(zhì)量控制及UDCA在家兔體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、熊去氧膽酸(UDCA)，化學(xué)名為3α,7β-二羥基-5β-膽甾烷-24-酸，為親水性膽汁酸，具有松弛輸膽總管括約肌、促進(jìn)膽汁分泌以及促進(jìn)膽汁排出的作用，除此之外還具有細(xì)胞保護(hù)、免疫調(diào)節(jié)等作用，是目前唯一被FDA批準(zhǔn)用于膽汁淤積性肝病治療的藥物，臨床上廣泛用于治療肝病。 本文對(duì)熊去氧膽酸膠囊的質(zhì)量控制方法進(jìn)行了深入研究。根據(jù)其性質(zhì)與結(jié)構(gòu)特征確定了理化鑒別、雜質(zhì)檢查以及含量測(cè)定方法。采用HPLC法分別測(cè)定熊去氧膽酸的含量，進(jìn)行了膽酸

2、、膽石酸、鵝去氧膽酸、7.酮基膽石酸四個(gè)已知雜質(zhì)和其他相關(guān)雜質(zhì)檢查。采用十八烷基硅烷鍵合相為固定相，以乙腈-0.001mol·L<'-1>磷酸二氫鈉溶液(45：55，磷酸調(diào)節(jié)pH2.2±0.1)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為206nm；流速為1.0ml·min<'-1>；柱溫為30℃。結(jié)果，熊去氧膽酸濃度在0.1～2.0mg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.9999)，檢測(cè)限為0.2g(S/N=3)；膽酸濃度在0.04～1.2mg/ml范

3、圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=1.0000)，檢測(cè)限為0.09μg(S/N=3)；膽石酸濃度在0.5～10mg/ml.范一圍.內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.9998)，檢測(cè)限為10μg(S/N=3)；7-酮基膽石酸濃度在0.072～0.72mg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.9999)，檢測(cè)限為5ng(S/N=3)；鵝去氧膽酸濃度在0.08～1.6mg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.9998)，檢測(cè)限為0.15μg

4、(S/N=3)。中間精密度RSD為0.16％(n=5)，重復(fù)性RSD為1.3％(n=6)，平均回收率為100.2％。根據(jù)多批樣品測(cè)定結(jié)果，規(guī)定樣品中膽酸含量不得過(guò)0.5％，膽石酸含量不得過(guò)0.1％，鵝去氧膽酸含量不得過(guò)1.0％，7-酮基膽石酸含量不得過(guò)0.4％，其他單個(gè)相關(guān)雜質(zhì)含量不得過(guò)0.25％，其他相關(guān)雜質(zhì)總含量不得過(guò)0.5％，雜質(zhì)總量不得過(guò)2.0％，熊去氧膽酸含量應(yīng)為標(biāo)示量的95.0％～105.0％。并依據(jù)所建標(biāo)準(zhǔn)對(duì)40℃加速六個(gè)

5、月以及常溫下放置24個(gè)月的中試樣品進(jìn)行了穩(wěn)定性考察。所建方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，適于作為熊去氧膽酸膠囊的質(zhì)量控制用。本課題進(jìn)行了熊去氧膽酸在家兔體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究。建立了乙醚提取一柱前衍生化血漿樣品預(yù)處理方法，采用Hypersil C<,18>柱(250×4.6mm，10μm)，乙腈-甲醇-0.005mol.L<'-1>NaH<,2>PO<,4>緩沖液.三乙胺(50:27:42:0.25，磷酸調(diào)節(jié)pH3.0±0.1)為流動(dòng)相的HPLC法，以溴

6、苯乙酮為衍生化試劑，在247nm處測(cè)定家兔血漿中熊去氧膽酸衍生化產(chǎn)物。在此色譜條件下，熊去氧膽酸濃度在0.15～10.0μg/ml范圍內(nèi)，與峰面積比值的線性關(guān)系良好(r=0.9998)，定量限為0.15μg/ml。熊去氧膽酸的萃取回收率>90％，空白加樣回收率、樣品加樣回收率均>95％，日內(nèi)和日間精密度的RSD均<15％，本法可用于熊去氧膽酸在家兔體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究。 應(yīng)用所建方法對(duì)兩組各6只家兔進(jìn)行了兩個(gè)劑量組UDCA灌胃后

7、的藥代動(dòng)力學(xué)研究。試驗(yàn)結(jié)果表明，熊去氧膽酸在家兔體內(nèi)處置符合二室模型，藥物進(jìn)入家兔體內(nèi)后被迅速吸收，在5min內(nèi)即達(dá)到峰濃度，其主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)均值為：A劑量組(20mg/kg)：藥時(shí)曲線下面積(AUC<,0-∞>)為14.1340±6.1410mg.L<'-1>.h；吸收半衰N(T<,1/2,ka>)為0.0039±0.0042h；分布半衰期(T<,1/2,a>)為0.5797±0.2907h；消除半衰期(T<,1/2,β>)為45

8、.0204±27.2369h；表觀分布容積(V<,1>)為5.2149±2.7386L·kg<'-1>；清除率(CL)為1.7161±0.8751L.h<'-1>.kg<'-1>；達(dá)峰時(shí)N(Tmax)為0.0833h；達(dá)峰濃度(Cmax)為5.9344±1.6538mg·L<'-1>。B劑量組(10mg/kg)：藥時(shí)曲線下面積(AUC<,0-∞>)為4.3440±1.8553mg·L<'-1>.h；吸收半衰期(T<,1/2,ka>)為0

9、.0003±0.0005h；分布半衰期(T<,1/2，a>)為0.2910±0.3485h；消除半衰期(T<,1/2,β>)為13.8642±25.0494h；表觀分布容積(V<,1>)為0.9653±0.8329L·kg<'-1>；清除率(CL)為0.0183±0.0375L·h<'-1>.kg<'-1>；達(dá)峰時(shí)間(Tmax)為0.0833h；達(dá)峰濃度(Cmax)為4.9410±2.8722mg.L<'-1>。本研究可為熊去氧膽酸及其