硫酸鋁鉀對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠胚胎細(xì)胞增殖和分化的影響.pdf

1、目的:觀察硫酸鋁鉀對(duì)體外培養(yǎng)的胚胎中腦神經(jīng)細(xì)胞和肢芽細(xì)胞增殖、分化的影響，并探討其體外發(fā)育毒性特點(diǎn)，為揭示其致畸性及其作用機(jī)理提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:根據(jù)Flint等提出的胚胎細(xì)胞微團(tuán)培養(yǎng)方法，在本實(shí)驗(yàn)室首次建立小鼠胚胎中腦神經(jīng)細(xì)胞和肢芽細(xì)胞微團(tuán)培養(yǎng)模型，并用陽(yáng)性對(duì)照物維生素A驗(yàn)證其可靠性。從12天齡小鼠胚胎中分離出中腦神經(jīng)細(xì)胞和肢芽細(xì)胞，體外暴露于不同劑量的陽(yáng)性對(duì)照物維生素A(終濃度分別為0.125、1.25、12.5、25.0

2、和50.0μg/ml培養(yǎng)液)和硫酸鋁鉀(A13+終濃度分別為0.1、1、2、4、8、10、20、40、80和100μmol/L培養(yǎng)液)，連續(xù)培養(yǎng)5天。5天后，根據(jù)噻唑藍(lán)(MTT)比色試驗(yàn)和細(xì)胞集落形成抑制水平來(lái)反映維生素A、硫酸鋁鉀對(duì)體外培養(yǎng)的中腦神經(jīng)細(xì)胞和肢芽細(xì)胞增殖、分化的影響。 結(jié)果:1.維生素A對(duì)體外培養(yǎng)的胚胎中腦神經(jīng)細(xì)胞的增殖和分化均有抑制作用，并有明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系(r=-0.915、r=-0.921，P＜0.05

3、)，其半數(shù)增殖抑制濃度(ICv50)和半數(shù)分化抑制濃度(ICd50)分別為13.1μg/ml、0.64μg/ml，與報(bào)道基本一致，證明所建方法可靠。 2.維生素A對(duì)體外培養(yǎng)的胚胎肢芽細(xì)胞的增殖和分化均有抑制作用，并有明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系(r=-0.932、r=-0.947，P＜0.05)，其半數(shù)增殖抑制濃度(ICv50)和半數(shù)分化抑制濃度(ICd50)分別為5.1μg/ml、0.04μg/ml，與報(bào)道基本一致，證明所建方法可靠。

4、 3.不同劑量的硫酸鋁鉀對(duì)體外培養(yǎng)的胚胎中腦細(xì)胞的增殖和分化均有抑制作用，并有明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系(r=-0.975、r=-0.936，P＜0.05)，其半數(shù)增殖抑制濃度(ICv50)和半數(shù)分化抑制濃度(ICd50)分別為43.75μmol/L、3.70μmol/L，V/D值為11.82。 4.不同劑量的硫酸鋁鉀對(duì)體外培養(yǎng)的胚胎肢芽細(xì)胞的增殖和分化也均有抑制作用，并有明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系(r=-0.972、r=-0.92