不同培養(yǎng)方法和細胞因子對小鼠生精細胞的增殖分化效應.pdf

1、文章內容分為兩部分進行了介紹：
　　第一部分 不同培養(yǎng)方法對小鼠生精細胞的增殖分化效應
　　目的:比較曲細精管片段培養(yǎng)和混合細胞共培養(yǎng)兩種不同方法對小鼠生精細胞的增殖分化效應,旨在建立一個高效、穩(wěn)定的小鼠生精細胞體外培養(yǎng)方法,獲得更多接近成熟的單倍體精子細胞。方法:對7~8天齡小鼠生精細胞分別進行曲細精管片段培養(yǎng)和混合細胞共培養(yǎng),通過細胞形態(tài)學觀察、存活率和粗線期精母細胞特異性基因P19、單倍體精子細胞特異性基因TP1檢測及

2、染色體倍性分析,比較兩種培養(yǎng)方法生精細胞的存活、增殖以及分化情況。結果:曲細精管片段培養(yǎng)法第10~12天可見到圓形精子細胞,13~14天出現(xiàn)少量帶鞭毛的精子細胞或長形精子,第10天可檢測出單倍體峰和單倍體精子細胞特異性基因TP1表達;混合細胞培養(yǎng)法5~7天可見圓形精子細胞,第5天即可檢測出單倍體峰和單倍體精子細胞特異性基因TP1表達,8~10天少量精子細胞長出鞭毛或胞體漸變成長形?；旌霞毎囵B(yǎng)法所獲細胞數、存活率及單倍體精子細胞分化率均

3、顯著高于曲細精管片段培養(yǎng)法(P<0.05)。培養(yǎng)過程中,各級生精細胞隨培養(yǎng)時間延長,存活率逐漸降低,細胞數減少,曲細精管片段培養(yǎng)和混合細胞培養(yǎng)分別在第3周和第4周出現(xiàn)大部分生精細胞和支持細胞脫落死亡。結論:曲細精管片段培養(yǎng)和生精細胞-支持細胞共培養(yǎng)均可獲得單倍體精子細胞,較之曲細精管片段培養(yǎng)法,混合細胞共培養(yǎng)法存活率更高,可更早獲得更多單倍體精子細胞。
　　第二部分 EGF和SCF對小鼠生精細胞的體外增殖分化效應
　　目的:

4、通過在生精細胞體外培養(yǎng)過程中添加不同濃度表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)和干細胞因子(stem cell factor,SCF),探討兩種細胞因子對生精細胞增殖、分化的最佳作用濃度以及它們之間的最佳組合濃度。方法:對7~8天齡小鼠生精細胞進行混合細胞體外培養(yǎng),在培養(yǎng)基中分別添加不同濃度的EGF和SCF(分別為5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、100ng/ml),并進行EG

5、F和SCF的交互實驗,通過細胞形態(tài)學觀察、存活率和粗線期精母細胞特異性基因P19、單倍體精子細胞特異性基因TP1檢測及染色體倍性分析,探討EGF和SCF對生精細胞的體外增殖分化效應。結果:加入 EGF或 SCF2-4天,各濃度組中可見不同程度增殖呈團或鏈狀的細胞團緊密連接,以EGF20ng/ml組和SCF40ng/ml組較為明顯,第5-7天出現(xiàn)圓形精子細胞,8-10天少部分精子細胞長出鞭毛或漸變成長形精子細胞,第4周出現(xiàn)大部分生精細胞和

6、支持細胞脫落死亡。培養(yǎng)第7天,EGF濃度為20ng/ml、SCF濃度為40ng/ml時生精細胞數和存活率顯著高于與其它各濃度組(P<0.05),且濃度為40ng/ml的SCF可顯著提高單倍體峰并降低P19/TP1比值(P<0.05)。EGF與SCF配伍時,EGF濃度為12ng/ml時生精細胞增殖率最高,而SCF的作用效果呈線性遞增趨勢。結論:在混合生精細胞體外培養(yǎng)體系中,添加一定濃度的EGF和SCF可顯著提高生精細胞數和存活率,而且SC