人參皂甙Rg1對成人軟骨細胞增殖及堿性成纖維樣生長因子表達的影響.pdf

1、目的:在臨床上,由外傷或疾病引起的關(guān)節(jié)軟骨損傷很常見,多為成年人和老年人,尤其是骨關(guān)節(jié)炎病,在老年人中更為常見。由于軟骨組織中不具有血管與神經(jīng),其損傷后難以自我恢復(fù)。區(qū)別以往的實驗研究對象大多為動物或者人胚胎的關(guān)節(jié)軟骨細胞,我們以成人關(guān)節(jié)軟骨細胞為研究對象,在人參皂甙Rg1的單獨作用下,通過細胞形態(tài)學(xué)、細胞計數(shù)、Ⅱ型膠原免疫組化等觀察檢測手段,了解單獨應(yīng)用人參皂甙Rg1對其增殖的促進作用,并于培養(yǎng)第七天用ELISA法測定堿性成纖維樣生長

2、因子(bFGF)的表達,為研究人參皂甙Rg1對成人關(guān)節(jié)軟骨的體外培養(yǎng)擴增機制提供理論依據(jù)。
　　方法:①成人關(guān)節(jié)軟骨分離、培養(yǎng)。②倒置顯微鏡下觀察軟骨細胞生長狀況,并對培養(yǎng)的1至4代的軟骨細胞進行細胞計數(shù),繪制生長曲線。③細胞計數(shù)繪制生長曲線,觀察在人參皂甙Rg1作用下軟骨細胞的增殖情況。④倒置顯微鏡下觀察人參皂甙Rg1作用下軟骨細胞形態(tài)學(xué)改變。⑤免疫組織化學(xué)法觀察人參皂甙Rg1對軟骨細胞Ⅱ型膠原表達的影響。⑥用ELISA法測定細

3、胞上清液,全細胞,裂解細胞上清液及裂解細胞的bFGF表達。⑦采用獨立樣本t檢驗、單因素方差分析及重復(fù)測量因素方差分析,應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果:①原代關(guān)節(jié)軟骨細胞接種6小時后開始貼壁,培養(yǎng)72小時后大部分細胞貼壁,形態(tài)由球形逐漸向外伸展出突起而轉(zhuǎn)變?yōu)槎噙呅?。隨著細胞增殖數(shù)量增加,體積逐漸增大,細胞形態(tài)也慢慢趨于一致。②實驗細胞接種后出現(xiàn)潛伏期,對照組自第3天起細胞也進入對數(shù)增殖期,到第7天細胞數(shù)約為

4、接種時的8倍。藥物組自第2天~3天起細胞增殖能力增強,到第7天細胞數(shù)約為接種時的15倍,明顯高于對照組(P=0.00<0.05)。所以我們認為,人參皂甙Rg1對軟骨細胞的增殖具有促進作用。③免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:藥物組和對照組均可見Ⅱ型膠原表達,胞漿染成棕色,細胞接觸部分可見較淺棕色。藥物組與對照組沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.625、0.800>0.05)。④ELISA法測定藥物組細胞上清液,全細胞,裂解細胞上清液及裂解細胞的bFGF表達均