力信號調(diào)控的大鼠成骨細胞力生長因子表達及其對成骨細胞生理行為的影響.pdf

1、本文采用了生物力學(xué)、細胞生物學(xué)、生物化學(xué)及分子生物學(xué)等方法，研究機械拉伸對成骨細胞力生長因子表達的影響和力生長因子對成骨細胞增殖和分化以及相關(guān)基因的影響。
　　主要內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　改進了周期性基底膜拉伸應(yīng)變裝置。改進后該裝置接種細胞量大，避免了以往實驗中多次收集細胞的麻煩。該裝置組裝簡便，應(yīng)變大小可由注入儲液囊的流體體積決定，頻率由控制系統(tǒng)的開關(guān)頻率調(diào)節(jié)，操作方便。
　　運用組織塊法培養(yǎng)了滿足實驗需求的大鼠顱骨成

2、骨細胞，并利用差時貼壁法對其進行了純化。通過形態(tài)觀察、Von Kossa染色和堿性磷酸酶（ALP）染色等方法進行了鑒定。結(jié)果表明所培養(yǎng)細胞具有成骨細胞的典型生物學(xué)行為，可以用于后續(xù)實驗。第二代至第六代的細胞用于后續(xù)實驗。
　　對細胞施加應(yīng)變量為15％周期性拉伸刺激，作用6h、12h、24h、36h后，分別收集細胞，提取蛋白質(zhì)，利用western blot法檢測是否有力生長因子（MGF）表達。結(jié)果顯示，在6h、24h時有少量MGF表

3、達，12h時較多，對照組和36h未觀察到。
　　以成骨細胞株MC3T3為對象，研究了力生長因子對細胞增殖和分化的影響。將力生長因子配成一定濃度的溶液，分別加入到接種細胞的96孔板中，用MTT法檢測其對細胞增殖的影響。利用堿性磷酸酶檢測試劑盒檢測ALP活性，分析其對細胞分化的影響。結(jié)果顯示，10ng/ml MGF明顯促進成骨細胞的增殖，抑制ALP分泌。
　　利用RT-PCR方法分析了加入MGF后細胞中BMP-2、Cbfα-1、