Genistein對人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞堿性成纖維生長因子表達(dá)的調(diào)控作用.pdf

1、視網(wǎng)膜血管新生是糖尿病性視網(wǎng)膜病、高血壓性視網(wǎng)膜病變以及視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞綜合癥等多種疾病的主要病理改變，是導(dǎo)致患者失明的重要原因之一。眼內(nèi)血管的形成以及與其相伴的滲出、出血及增生等一系列的病理改變可嚴(yán)重的破壞眼的結(jié)構(gòu)和功能。盡管炎癥、創(chuàng)傷、腫瘤等很多情況下均可伴發(fā)新生血管，但與眼內(nèi)新生血管關(guān)系最為密切的病因仍是缺血、缺氧。 Genistein(Gen)是從大豆蛋白中提取的主要活性物質(zhì)，作為經(jīng)典的酪氨酸激酶抑制劑具有廣泛的作用，

2、其不僅對乳腺癌、前列腺癌有很強(qiáng)的化學(xué)預(yù)防作用，而且對心血管疾病和其他一些慢性病都有明顯的治療作用。Gen在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中可以抑制由bFGF(basicfibroblastgrowthfactor)誘導(dǎo)的脈絡(luò)膜和角膜血管新生，我們以往的研究也發(fā)現(xiàn)，Gen可以顯著抑制相對缺氧誘導(dǎo)C57小鼠視網(wǎng)膜血管新生，以及Gen可以顯著抑制缺氧誘導(dǎo)的RPE(retinalpigmentepitheliumcells)細(xì)胞的VEGF(vascularendot

3、helialgrowthfactor)和HIF-1(hypoxiainduciblefactor-1)的表達(dá)。雖然VEGF在常氧和缺氧條件下都是一種高效的促進(jìn)視網(wǎng)膜血管新生的因子，但有報(bào)導(dǎo)說在相同的劑量下bFGF有比VEGF更強(qiáng)的促進(jìn)眼部血管新生的作用。盡管如此Gen抑制眼內(nèi)血管新生的分子機(jī)制尚未完全明確。 視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(retinalpigmentepithelium，RPE)位于視網(wǎng)膜的最外層，具有對視網(wǎng)膜外層傳遞來自

4、脈絡(luò)膜的營養(yǎng)，和對光感受器外節(jié)脫落的膜盤以及代謝產(chǎn)物進(jìn)行吞噬作用，起著視網(wǎng)膜-脈絡(luò)膜屏障作用。許多研究已經(jīng)表明RPE細(xì)胞能夠分泌多種細(xì)胞因子和生長因子，在一些血管新生性眼病的病理過程起著重要的作用，其中HIF-1,VEGF和bFGF在視網(wǎng)膜血管新生性疾病的病理過程中可能起著非常重要的作用。 本實(shí)驗(yàn)室的前期工作已經(jīng)證明Gen具有很強(qiáng)的抑制視網(wǎng)膜血管新生的作用，同時(shí)發(fā)現(xiàn)Gen能夠顯著抑制缺氧誘導(dǎo)RPE的HIF-1和VEGF的表達(dá)，為

5、進(jìn)一步在細(xì)胞水平上研究Gen抑制視網(wǎng)膜血管新生的可能機(jī)制，我們繼續(xù)研究缺氧(95﹪N2、5﹪CO2)等條件下bFGF的表達(dá)以及Gen對此表達(dá)的影響。采用RT-PCR和westernblot方法，半定量測定人RPE細(xì)胞在缺氧處理后bFGFmRNA和蛋白的表達(dá)，以及Gen對其的影響。結(jié)果提示缺氧處理可明顯增加人RPE細(xì)胞bFGFmRNA的表達(dá)，Gen處理24h后，bFGFmRNA的水平可達(dá)正常對照組的2倍以上。如細(xì)胞缺氧實(shí)驗(yàn)前經(jīng)Gen(10

6、，20，50，100，200μmol/L組)預(yù)處理30min，細(xì)胞內(nèi)bFGFmRNA的水平可呈濃度依賴性的下降。200μMGen作用下bFGFmRNA的水平降至對照的30.4﹪。Westernblot實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)缺氧條件下bFGF蛋白表達(dá)也明顯增高，可達(dá)正常對照組的2倍以上。Gen(10，20，50，100，200μmol/L組)預(yù)處理同樣呈濃度依賴性的抑制了缺氧誘導(dǎo)的bFGF蛋白的表達(dá)。其中Gen200μM組作用最為顯著，bFGF