調(diào)控HIF-1α對(duì)鼻黏膜上皮細(xì)胞生長因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究采用短發(fā)夾RNA(shRNA)特異性沉默人鼻黏膜上皮細(xì)胞(human nasal epithelial cells，HNEC)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia induciblefactor-1α,HIF-1α)，觀察其對(duì)HNEC表達(dá)血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelialgrowth factor，VEGF)、轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factor，TGF)β1、堿性成纖維細(xì)胞

2、生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF/fibroblast growthfactor-2，F(xiàn)GF-2）三種生長因子的影響。
　　方法：取因鼾癥行下鼻甲切除術(shù)患者的下鼻甲黏膜，體外培養(yǎng)原代細(xì)胞，體外設(shè)計(jì)合成以腺病毒為載體GFP標(biāo)記的shRNA(包括ad-HIF shRNA及ad-HIFshRNA-neg)。將細(xì)胞分為空白對(duì)照組、無義寡核苷酸陰性對(duì)照組(ad-HIFshRNA-neg)、ad

3、-HIF shRNA干擾組、低氧培養(yǎng)組。蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(yàn)Westernblot技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染病毒后HNEC中HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF的蛋白的表達(dá)情況;RT-PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)技術(shù)檢測(cè)HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF的mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：轉(zhuǎn)染ad-HIF shRNA-neg前后，HIF-1α、VEGF

4、、TGF-β1、bFGF的蛋白差異(q1=1.3167; q2=0.7513; q3=0.3251; q4=0.6592)及其mRNA差異（q1=2.3514; q2=37.0480; q3=17.1131; q4=1.0917）均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。與陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染ad-HIF shRNA后，HIF-1α表達(dá)蛋白下降40％(q=31.4690)，mRNA表達(dá)下降39％(q=16.5900)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義(p＜0.05);同時(shí)VEGF、TGF-β1、bFGF的蛋白及mRNA表達(dá)也隨之下降，蛋白差異(q1=19.1571; q2=33.8090; q3=45.8940)及 mRNA差異(q1=22.3920;q2=17.8800; q3=11.5991)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組相比，低氧培養(yǎng)HNEC，其HIF-1α表達(dá)蛋白升高50％(q=32.3540)，mRNA表達(dá)升高46％(q=15.4570)差異均

6、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);同時(shí)VEGF、TGF-β1、bFGF的蛋白及mRNA表達(dá)也隨之升高，蛋白差異(q1=20.2410; q2=35.2010;q3=47.3150)及mRNA差異(q1=21.4713; q2=18.3710; q3=10.3651)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　結(jié)論：特異性阻斷HNEC的HIF-1α表達(dá)能夠有效地抑制其VEGF、TGF-β1和bFGF的表達(dá)低氧培養(yǎng)使HNEC中HIF-1α表達(dá)升