EZH2和MAL基因與口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系.pdf

1、第一部分
　　 目的：口腔黏膜白斑是口腔最普遍和最重要的癌前病損之一，在一定的時(shí)間內(nèi)，部分口腔黏膜白斑可以發(fā)展成口腔黏膜鱗癌。為了評(píng)價(jià)口腔黏膜白斑癌變風(fēng)險(xiǎn)，本研究主要探討轉(zhuǎn)錄抑制子EZH2在口腔黏膜鱗癌癌變中的作用；分析是否可以作為口腔黏膜白斑癌變風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)指標(biāo)。
　　 方法：采用免疫組織化學(xué)技術(shù)分析EZH2蛋白在76例口腔黏膜白斑組織包括37例發(fā)生癌變和39例沒(méi)有發(fā)生癌變的口腔黏膜白斑組織中的表達(dá)；EZH2蛋白的表達(dá)與

2、口腔黏膜白斑患者的臨床病理參數(shù)及臨床預(yù)后進(jìn)行相關(guān)性研究；使用siRNAs沉默口腔黏膜白斑細(xì)胞系Leuk-1中EZH2內(nèi)源性的表達(dá)，分析EZH2對(duì)Leuk-1細(xì)胞細(xì)胞周期、錨定依賴性和非錨定依賴性的生長(zhǎng)和侵襲的影響。
　　 結(jié)果：EZH2蛋白在34例(45％)口腔黏膜白斑組織中強(qiáng)表達(dá)，26例(34％)口腔黏膜白斑組織中中度表達(dá)和16例(21％)口腔黏膜白斑組織中弱表達(dá)或不表達(dá)。EZH2蛋白在口腔黏膜白斑組織中強(qiáng)表達(dá)與口腔黏膜白斑組

3、織的上皮異常增生(P<0.001)和口腔黏膜白斑癌變風(fēng)險(xiǎn)度(P<0.0001)密切相關(guān)。多因素Cox回歸分析顯示EZH2的表達(dá)是口腔黏膜白斑癌變風(fēng)險(xiǎn)度獨(dú)立的預(yù)測(cè)指標(biāo)(P<0.0001)。在口腔黏膜白斑患者被確診后第5年，80％EZH2蛋白強(qiáng)表達(dá)的口腔黏膜白斑患者發(fā)生癌變；然而只有24％EZH2蛋白中度表達(dá)的口腔黏膜白斑患者發(fā)生癌變；EZH2蛋白表達(dá)弱或不表達(dá)的患者不發(fā)生癌變。EZH2沉默后能通過(guò)調(diào)控Cyclin D1下調(diào)表達(dá)和p15IN

4、K4B上調(diào)表達(dá)，抑制Leuk-1細(xì)胞的增殖、非錨定性生長(zhǎng)和侵襲能力。
　　 結(jié)論：EZH2蛋白在口腔黏膜白斑惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮著重要的作用；EZH2蛋白可以作為口腔黏膜白斑癌變風(fēng)險(xiǎn)度獨(dú)立的預(yù)測(cè)指標(biāo)。
　　 第二部分
　　 目的：為了鑒定和篩選口腔黏膜鱗癌新的、有用的生物標(biāo)志物，本課題組通過(guò)使用全基因組基因芯片技術(shù)，發(fā)現(xiàn)MAL在口腔黏膜鱗癌顯著下調(diào)表達(dá)。因此，本研究主要探討MAL在口腔黏膜鱗癌中的下調(diào)機(jī)制和MAL對(duì)口腔

5、黏膜鱗癌細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡潛能的影響。
　　 方法：首先，本研究通過(guò)使用半定量RT-PCR和實(shí)時(shí)定量RT-PCR在48對(duì)口腔黏膜鱗癌及其配對(duì)癌旁組織中驗(yàn)證MAL的表達(dá)情況；通過(guò)使用去甲基化劑5-Aza-dC和組蛋白去乙?；种苿㏕SA處理口腔黏膜鱗癌細(xì)胞系細(xì)胞以及使用亞硫酸氫鹽處理直接測(cè)序的方法，評(píng)估MAL在口腔黏膜鱗癌細(xì)胞和臨床標(biāo)本中DNA甲基化的水平；口腔黏膜鱗癌細(xì)胞系轉(zhuǎn)染MAL的真核表達(dá)載體，采用體外細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、平板克

6、隆形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期檢測(cè)、凋亡、侵襲和體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)MAL在口腔黏膜鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的具體作用。
　　 結(jié)果：與配對(duì)的癌旁組織相比，MAL轉(zhuǎn)錄水平在91.7％的口腔黏膜鱗癌臨床標(biāo)本中顯著下調(diào)(P<0.001)。而且，與正常上皮原代培養(yǎng)細(xì)胞相比，MAL轉(zhuǎn)錄水平在口腔黏膜鱗癌細(xì)胞系中表達(dá)下調(diào)至少5倍以上。分別使用TSA，5-Aza-dC和聯(lián)合使用兩種藥物處理9個(gè)口腔黏膜鱗癌細(xì)胞系，MAL在44％，67％和89％的口腔黏膜鱗癌細(xì)胞

7、系中上調(diào)表達(dá)。此外，亞硫酸氫鹽處理DNA直接測(cè)序?qū)嶒?yàn)表明，MAL啟動(dòng)子區(qū)的兩個(gè)CpG島M1和M2在口腔黏膜鱗癌細(xì)胞系中完全高甲基化(甲基化比率超過(guò)90％)；只有CpG島M1在口腔黏膜鱗癌臨床標(biāo)本中部分高甲基化(甲基化比率在20％到90％)。MAL異位性表達(dá)通過(guò)G1期阻滯和細(xì)胞凋亡抑制口腔黏膜鱗癌細(xì)胞的增殖；MAL外源性過(guò)表達(dá)可以抑制口腔黏膜鱗癌細(xì)胞侵襲和移植瘤的生長(zhǎng)。
　　 結(jié)論：本研究結(jié)果表明，異常甲基化引起的失活是MAL在口