胎膜來源間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)燒傷愈合的研究.pdf

1、目的：研究胎膜間充質(zhì)干細(xì)胞的分離方法，鑒定其來源于母親還是胎兒，并研究胎膜來源的間充質(zhì)干細(xì)胞在治療SD大鼠Ⅲ度燒傷中的作用。 方法：取足月產(chǎn)胎膜，分別用胰酶消化法、中性蛋白酶+胰酶消化法、中性蛋白酶+Ⅳ型膠原酶消化法處理，收集細(xì)胞懸液，加入Amino-Max Ⅱ培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)；流式細(xì)胞方法分別檢測三種方法分離培養(yǎng)的第5代細(xì)胞MSC表面標(biāo)志抗原CD34、CD45、CD73、CD90的表達(dá)；抽取男孩胎膜分離的第5代細(xì)胞DNA，P

2、CR檢測其Y染色體性別決定基因(SRY)表達(dá)情況。分別用濃度為3mg/ml、5mg/ml、7mg/ml、9mg/ml的明膠溶液包被脫細(xì)胞真皮(acellular dermal matrix，ADM)，以5×106/ml的密度將細(xì)胞種植在包被和未包被的ADM表面，2小時后收集未貼附在ADM上的細(xì)胞，計算細(xì)胞種植效率。實驗組：以7mg/ml的明膠包被ADM，以5×106/ml的密度種植第2～3代細(xì)胞，培養(yǎng)3～5天后，移植至SD大鼠Ⅲ度燒傷創(chuàng)

3、面；對照組I移植單純的ADM，對照組Ⅱ未進(jìn)行移植，術(shù)后定期觀察創(chuàng)面大體情況，計算創(chuàng)面收縮率、表皮再生面積比例，第5周切取新生皮膚組織行HE染色。 結(jié)果：三種方法均從胎膜中成功分離出貼壁細(xì)胞；細(xì)胞表達(dá)CD73、CD90，不表達(dá)CD34、CD45，為間充質(zhì)干細(xì)胞；PCR檢測發(fā)現(xiàn)男孩胎膜間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)SRY。不同濃度明膠溶液包被和未包被的ADM，其細(xì)胞種植效率均無明顯區(qū)別(P>0.05)；相比對照組，實驗組移植物成活時間更長，創(chuàng)面再