恒古骨傷愈合劑對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成脂分化的影響.pdf

1、目的：探究恒古骨傷愈合劑調(diào)控大鼠BMSCs成脂肪細胞分化的能力及其對防治骨質(zhì)疏松癥的作用機制。
　　方法:以大鼠BMSCs為研究對象，采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法，從幼年SD大鼠股骨和脛骨骨髓中分離培養(yǎng)BMSCs；免疫組織細胞化學染色檢測BMSCs細胞純度；恒古骨傷愈合劑分別稀釋500倍、1000倍、2000倍、4000倍，相對應分5組（control組、2×10-3組、1×10-3組、0.5×10-3組、0.25×10-3組），其中co

2、ntrol組加入溶媒；MTT法檢測各濃度恒古骨傷愈合劑對BMSCs細胞毒性；BMSCs在不同濃度恒古骨傷愈合劑干預下分別向脂肪細胞方向誘導分化；在恒古骨傷愈合劑干預后的第21天，Oil Red O染色后顯微鏡下觀察及酶標儀定量檢測成脂肪細胞分化情況；在恒古骨傷愈合劑干預后的第7天、14天、21天，Realtime-PCR定量檢測成脂肪細胞分化特異性轉(zhuǎn)錄因子過氧化物酶體增值物激活受體（PPAR）γ、CCAAT/增強子結(jié)合蛋白（C/EBP）

3、α的mRNA相對表達量。
　　結(jié)果：采用細胞貼壁生長法獲得大鼠（乳鼠）BMSCs；免疫組織細胞化學染色后熒光倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)BMSCs特異性表面抗原CD44陽性，陽性率為95.47%，而CD19陰性，提示培養(yǎng)的細胞為骨髓間充質(zhì)干細胞且純度高；?MTT法檢測結(jié)果示：在恒古骨傷愈合劑干預BMSCs后的0.5天、1天、4天、21天，各組與control組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。提示各濃度恒古骨傷愈合劑不論是早期還是晚

4、期，對BMSCs的增殖及細胞活性均無毒性作用；在恒古骨傷愈合劑干預BMSCs誘導成脂肪細胞分化的第21天，Oil Red O染色后顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)各濃度藥物均對BMSCs成脂肪細胞分化有抑制作用。成濃度依賴性，且濃度越高抑制作用越強。酶標儀定量檢測OD值分別為（1.104±0.414、0.785±0.085、0.836±0.138、1.008±0.369、1.000±0.291），2×10-3組、1×10-3組與control組比較，差

5、異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），與染色觀察結(jié)果一致；⑤恒古骨傷愈合劑能抑制脂肪細胞生成，下調(diào)脂肪細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子的表達。在恒古骨傷愈合劑干預的第7天、14天、21天，Realtime-PCR定量檢測結(jié)果提示PPARγ、C/EBPα基因表達量與control組比較下調(diào)且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：恒古骨傷愈合劑可通過下調(diào)PPARγ、C/EBPα的表達而抑制大鼠BMSCs成脂肪細胞分化。抑制BMSCs成脂肪細胞分化