阿爾茨海默病對(duì)小鼠認(rèn)知功能及RACK1表達(dá)的近日節(jié)律影響.pdf

1、[目的]
　　檢測(cè)BalB/c小鼠認(rèn)知功能的近日節(jié)律特點(diǎn)，并觀察阿爾茨海默病(Alzheimerdisease AD)對(duì)小鼠認(rèn)知能力近日節(jié)律的影響，探究RACK1在小鼠海馬中的表達(dá)特點(diǎn)，并觀察AD對(duì)RACK1的表達(dá)影響。
　　[方法]
　　將52只BalB/c小鼠隨機(jī)分成3組，分別是AD模型組、鹽水對(duì)照組及空白對(duì)照組。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，用ZB-200疲勞轉(zhuǎn)棒儀測(cè)3組小鼠在轉(zhuǎn)棒以上滯留時(shí)間;并對(duì)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組的小鼠分別在0

2、8:00、10:00、12:00、14:00、16:00、18:00、20:00、22:00、00:00、02:00、04:00、06:00進(jìn)行水迷宮測(cè)認(rèn)知能力，最后在12L/12D光照循環(huán)周期下（即08:00-20:00給予12小時(shí)的光照，20:00-第二天08:00全黑環(huán)境）進(jìn)行自發(fā)性活動(dòng)度的測(cè)定。上述實(shí)驗(yàn)完成后，將2μl的0.5％氯化鋁注入AD組小鼠的側(cè)腦室中，1次/天，連續(xù)注射5天，以建立AD模型小鼠;同時(shí)將2μl的生理鹽水注入

3、鹽水對(duì)照組的小鼠側(cè)腦室中，1次/天，連續(xù)注射5天，建立鹽水對(duì)照模型小鼠;空白對(duì)照組不做任何處理。手術(shù)完后，給予相同飲食，喂養(yǎng)2周。2周后，再重復(fù)以上3個(gè)實(shí)驗(yàn)。最后在ZT0、ZT6、ZT12及ZT18等4個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別斷頭處死3組小鼠，迅速剝離小鼠的海馬，行病理切片，同時(shí)用免疫組化檢測(cè)各組小鼠海馬中的RACK1表達(dá)變化，并用熒光RT-PCR測(cè)各組小鼠海馬中RACK1不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)情況。
　　[結(jié)果]
　　1.建模前，各組小鼠在

4、疲勞轉(zhuǎn)棒以上的滯留時(shí)間無(wú)差異（P＞0.05）;建模后，AD模型組的小鼠在疲勞轉(zhuǎn)棒儀上的滯留時(shí)間與其他兩組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，但鹽水對(duì)照組與空白對(duì)照組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，且AD模型組于建模后在疲勞轉(zhuǎn)棒儀上的滯留時(shí)間較建模前明顯減少，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而鹽水對(duì)照組和空白對(duì)照組在建模前后，其在轉(zhuǎn)棒儀上的滯留時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.建模前，各組小鼠的自發(fā)性活動(dòng)度

5、在12D環(huán)境中均比在12L環(huán)境中的顯著增多，有顯著差異性(P＜0.05)，表現(xiàn)出近日節(jié)律的特點(diǎn)，且三組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);建模后，AD組小鼠活動(dòng)度的近日節(jié)律消失，與其他兩組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01），表現(xiàn)為白天活動(dòng)增多，夜間活動(dòng)顯著減少，而鹽水對(duì)照組及空白對(duì)照組小鼠的活動(dòng)度仍表現(xiàn)近日節(jié)律的特點(diǎn)，與建模前相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.建模前，各組小鼠的水迷宮潛伏期隨時(shí)間變化而變化(P＜0.05)

6、，表現(xiàn)為白天潛伏期長(zhǎng)，而夜晚則稍短，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，呈近日節(jié)律的特點(diǎn);而在建模后，AD模型組的潛伏期在白晝均比其建模前延長(zhǎng)，且近日節(jié)律的特點(diǎn)消失，其在白晝的潛伏期無(wú)差異性(P＞0.05);兩個(gè)對(duì)照組在建模后的潛伏期與建模前無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，且仍表現(xiàn)近日節(jié)律的特點(diǎn)。
　　4.HE染色觀察結(jié)果顯示:鹽水對(duì)照組和空白對(duì)照組小鼠海馬神經(jīng)元層排列整齊，細(xì)胞體積較大，細(xì)胞核大而圓，核仁明顯，AD模型組小鼠的海馬神經(jīng)元

7、數(shù)量有一定的減少，可見呈固縮狀的壞死神經(jīng)元，部分神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有空化現(xiàn)象，并且神經(jīng)元細(xì)胞層排列紊亂。
　　5.免疫組化結(jié)果顯示:AD模型組的RACK1表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值比其他兩組的小，有顯著性差異（P＜0.05）;但鹽水對(duì)照組和空白對(duì)照組的陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　6.熒光RT-PCR結(jié)果顯示:AD模型組RACK1 mRNA的△CP與其他兩個(gè)對(duì)照組的△CP值相比明顯偏高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)

8、意義(P＜0.05)，而空白對(duì)照組和鹽水對(duì)照組RACK1 mRNA的△CP相比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。將兩對(duì)照組的RT-PCR數(shù)據(jù)結(jié)果合成一組，并比較RACK1 mRNA在ZT0、ZT6、ZT12和ZT18表達(dá)情況，結(jié)果顯示:ZT0及ZT6之間的△CP比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，ZT12及ZT18之間的△CP比較亦無(wú)差異性(P＞0.05)，而ZT0與ZT12、ZT18之間的△CP比較及ZT6與ZT12、ZT18之間的△CP

9、比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AD模型組小鼠的RACK1 mRNA在ZT0、ZT6、ZT12及ZT18時(shí)間點(diǎn)的△CP比較均無(wú)差異性（P＞0.05）。
　　[結(jié)論]
　　1.本實(shí)驗(yàn)利用0.5％氯化鋁成功建立了AD模型;并使用生理鹽水成功建立鹽水對(duì)照模型;
　　2.鹽水對(duì)照組小鼠的各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示手術(shù)本身對(duì)小鼠沒有產(chǎn)生影響;
　　3.正常情況下的小鼠，其自發(fā)性活動(dòng)度及認(rèn)知功能均呈近日節(jié)律的特點(diǎn);AD使小鼠的體