細胞外ATP經(jīng)P2嘌呤受體誘導細胞周期進展與肝臟增殖的研究.pdf

1、近年來，細胞外ATP已成為重要的信息分子，在細胞應激條件下，ATP可從細胞內(nèi)分泌釋放出來，它通過激活細胞表面受體對多種組織和器官的多種功能進行調(diào)節(jié)，也包括對再生的調(diào)節(jié)作用。盡管人們已經(jīng)知道細胞外ATP可對肝臟的許多功能進行調(diào)節(jié)，但它在肝細胞增殖和再生中所起的作用迄今尚不清楚。本課題研究的目的是探討細胞表面的嘌呤信號是否能通過激活JNK來促進肝細胞的增殖及肝臟的再生，及P2嘌呤受體所介導的Ca2+和蛋白激酶C(PKC)信號系統(tǒng)在JNK信號

2、的誘導方面的作用。　　實驗結果表明，應用ATPγS(非水解性ATP的類似物)處理原代肝細胞時再現(xiàn)了與肝臟再生有關的一系列早期信號，如快速而短暫的JNK信號系統(tǒng)的激活，立即早期基因(immediateearlygenes)-c-jun和c-fos的mRNA的表達增高及活化蛋白-1(AP-1)DNA結合活性的增強等。激活劑選擇性試驗的結果顯示UTP＞ATP＞ATPγS。這表明細胞外ATP是通過激活P2Y2受體而起作用。體外試驗結果也表明，

3、當ATPγS單獨作用或與表皮生長因子(EGF)協(xié)同作用可促進與細胞周期進展有關的關鍵性細胞周期蛋白(Cyclin)如細胞周期蛋白D1的表達，增殖細胞核抗原(PCNA)的蛋白表達和肝細胞的增殖。特別需要指出的是，10nM的ATP就足以增強EGF誘導的細胞周期蛋白D1的表達。Phospho-JNK，Phospho-c-jun，細胞周期蛋白D1及PCNA的免疫印跡結果顯示，部分肝臟切除可快速而強烈的誘導JNK信號系統(tǒng)的活化，并增強對未切除肝臟

4、對增殖的反應。Ki67及PCNA的免疫組化分析也證實了這一結果。體內(nèi)試驗顯示通過門靜脈輸注ATP可直接激活肝臟的JNK信號，而輸注P2嘌呤受體的拮抗劑－PPADS，并對Sprague-Dawley大鼠施行部分肝臟切除，可抑制JNK的活化以及肝臟的再生。此外，為了探討蛋白激酶C是否是潛在的上游介導物并激活肝細胞的JNK信號，我們還應用了小分子PKC的抑制劑Go6976，Go6983及Go6850，它們特異性的抑制不同的PKC亞型。結果顯示

5、，細胞外ATP可快速誘導多種Ca-依賴、Ca-不依賴及非典型性蛋白激酶C亞型的活化及其亞型由胞質向胞膜的轉位。我們的免疫組化染色顯示，一種非典型性的PKC亞型-PKCμ可在ATPγS作用下，10分鐘內(nèi)由胞質轉移至胞核內(nèi)。試驗結果還顯示，ATPγS誘導的JNK活化并不依賴于Ca2+信號和PLC?！　〗Y論：在體外，細胞外ATP作為肝臟的有絲分裂原可激活JNK信號及肝細胞的增殖。在體內(nèi)，細胞外ATP也可促發(fā)再生肝臟中的JNK信號。細胞外AT