重癥急性胰腺炎神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫功能變化及烏司他丁、生長抑素、丹參早期干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：急性胰腺炎(AcutePancreatitis，AP)是指多種病因引起的胰酶激活，繼以胰腺局部炎癥反應(yīng)為主要特征，伴或不伴有其他器官功能改變的疾病，20-30％患者臨床經(jīng)過兇險(xiǎn)，總體病死率為5-10％。是常見外科急腹癥，以發(fā)病快、病變多端、病情兇險(xiǎn)、死亡率高而為臨床醫(yī)生所棘手。本研究通過建立SD大鼠SAP動(dòng)物模型，觀察胰腺、肺、肝、心、腎、小腸等臟器病理形態(tài)及其功能變化，研究SAP時(shí)血單個(gè)核細(xì)胞和胰腺組織細(xì)胞生長激素(growth

2、hormone，GH)及生長抑素(somatostatin，SS)表達(dá)變化，血清β-內(nèi)啡肽(β-endorphin，β-END)、促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropichormone，ACTH)、糖皮質(zhì)激素(glucocorticosteroid，GC)、GH、SS變化；T淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞及IgG、IgM、IgA的變化；血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-2、IL-10變化；并根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求選用烏司他丁、

3、外源性生長抑素(思他寧，Stilamin)及丹參早期干預(yù)。旨在：①探討SAP對肺、肝、心、腎、小腸等器官形態(tài)和功能影響及內(nèi)毒素血癥、臟器感染的發(fā)生情況，并建立一個(gè)穩(wěn)定、重復(fù)性好并可實(shí)施靜脈用藥的SAP動(dòng)物模型；②初步探討SAP時(shí)神經(jīng)內(nèi)分泌功能的變化，從神經(jīng)內(nèi)分泌功能的調(diào)理角度，為臨床應(yīng)用烏司他丁、外源性生長抑素(思他寧)治療SAP提供依據(jù)；③探討SAP時(shí)淋巴細(xì)胞免疫功能變化及其意義，為臨床開展SAP時(shí)機(jī)體特異性免疫功能的判斷、SAP病程

4、進(jìn)展及預(yù)后監(jiān)測，以及為應(yīng)用烏司他丁、丹參對SAP時(shí)免疫功能異常的早期調(diào)理提供依據(jù)；④探討促炎細(xì)胞因子、抗炎細(xì)胞因子及NF-κB在SAP發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制，為SAP病情判斷、預(yù)后監(jiān)測及應(yīng)用烏司他丁、外源性生長抑素(思他寧)免疫調(diào)理提供依據(jù)；⑤探討SAP時(shí)紅細(xì)胞免疫功能、氧自由基的變化及其意義，為臨床開展SAP時(shí)機(jī)體紅細(xì)胞免疫功能的判斷、SAP病程預(yù)后監(jiān)測以及應(yīng)用烏司他丁、丹參對SAP時(shí)紅細(xì)胞免疫功能異常的早期調(diào)理提供依據(jù)。

5、 方法：第一部分：SAP動(dòng)物模型的建立及其對多器官的影響。選用健康SD大鼠100只，隨機(jī)分為10組，每組10只，分別為假手術(shù)(False，F(xiàn))1小時(shí)組(F1h)、2小時(shí)組(F2h)、6小時(shí)組(F6h)、12小時(shí)組(F12h)、24小時(shí)組(F24h)；SAP1小時(shí)組(SAP1h)、2小時(shí)組(SAP2h)、6小時(shí)組(SAP6h)、12小時(shí)組(SAP12h)、24小時(shí)組(SAP24h)。 第二部分：SAP時(shí)β-END、ACTH、

6、GC、GH、SS變化及烏司他丁、生長抑素早期干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究。 第三部分：SAP時(shí)淋巴細(xì)胞免疫功能變化及烏司他丁、丹參早期干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究。 選擇健康SD大鼠140只，隨機(jī)分為14組，每組10只。分別為假手術(shù)不同時(shí)點(diǎn)組(同第一部分)；SAP不同時(shí)點(diǎn)組(同第一部分)；烏司他丁(w組)治療2小時(shí)組(W2h)、6小時(shí)組(W6h)；丹參(D組)治療2小時(shí)組(D2h)、6小時(shí)組(D6h)。 第四部分：SAP促炎與抗炎細(xì)胞因子、

7、IL-2R、IL-6R、NF-κB變化及烏司他丁、生長抑素早期干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究。 選擇健康SD大鼠140只，隨機(jī)分為14組，每組10只。分別為假手術(shù)不同時(shí)點(diǎn)組(同第一部分)；SAP不同時(shí)點(diǎn)組(同第一部分)；烏司他丁治療組2小時(shí)組(W2h)、6小時(shí)組(W6h)；思他寧治療2小時(shí)組(S2h)、6小時(shí)組(S6h)。 第五部分：SAP時(shí)紅細(xì)胞免疫功能、氧自由基變化及烏司他丁、丹參早期干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究。 結(jié)果：第一部分：SAP

8、動(dòng)物模型的建立及其對多器官的影響。 SAP組、F組腹水及胰、肺、肝、心、腎、小腸及網(wǎng)膜病理形態(tài)學(xué)變化 肺臟大體觀察：假手術(shù)組無明顯改變；SAP各組肺臟可見輕度充血水腫和偶見血性胸腔積液(0.5-2ml)。 肝臟大體觀察：假手術(shù)組無明顯改變；SAP各組肝臟可見充血、腫脹，且隨時(shí)間的延長逐漸加重。 心臟大體觀察：假手術(shù)組無明顯改變，SAP各組除偶見心臟顏色變暗外無其他明顯改變。組織學(xué)觀察：假手術(shù)組各時(shí)點(diǎn)無明顯

9、變化；SAP組可見心肌肌小節(jié)橫紋模糊，顆粒變性，肌纖維間散在出血，并隨時(shí)點(diǎn)延長而更加明顯。 腎臟大體觀察：假手術(shù)組無明顯改變，SAP各組見腎臟周圍脂肪皂化外無其他明顯改變。 小腸大體觀察：假手術(shù)組無明顯改變；SAP各組腸管擴(kuò)張，粘膜表面出血，腸腔內(nèi)可見淡紅色液體。 腸粘膜超微結(jié)構(gòu)觀察：假手術(shù)組腸絨毛排列整齊，SAP組呈不同程度的排列紊亂現(xiàn)象。在SAP12h、SAP24h可見腸絨毛表面微絨毛廣泛脫落、絨毛倒伏，其頂

10、端上皮剝脫呈花瓣?duì)?。微絨毛排列稀疏、脫落。隨時(shí)點(diǎn)延長更加明顯。 2與同時(shí)點(diǎn)對照組(F組)相比，SAP各時(shí)點(diǎn)組的AMY、ALT、AST、Cr、BUN均明顯升高(P＜0.01)； 3與同時(shí)點(diǎn)對照組(F組)相比，SAP各時(shí)點(diǎn)組的CK、LDH、HBDH均明顯升高(P＜0.01或P＜0.05)； 5所有F組、SAP1h、SAP2h組的各臟器組織細(xì)菌培養(yǎng)均為陰性，而SAP6h、12h、24h組均有不同程度的各臟器組織細(xì)菌培養(yǎng)

11、為陽性，SAP6h、12h、24h胰腺、肺臟、腸系膜細(xì)菌培養(yǎng)的陽性率較同時(shí)點(diǎn)F組明顯升高(P＜0.05)，SAP12h、24h肝臟細(xì)菌培養(yǎng)的陽性率較同時(shí)點(diǎn)F組明顯升高(P＜0.05); 第二部分：SAP時(shí)β-END、ACTH、GC、GH、SS變化及烏司他丁、生長抑素早期干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究。 第三部分：SAP時(shí)淋巴細(xì)胞免疫功能變化及烏司他丁、丹參早期干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究。 第四部分：SAP促炎與抗炎細(xì)胞因子、IL-2R、IL

12、-6R、NF-κB變化及烏司他丁、生長抑素早期干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究。 第五部分：SAP時(shí)紅細(xì)胞免疫功能、氧自由基變化及烏司他丁、丹參早期干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究。 結(jié)論第一部分：SAP動(dòng)物模型的建立及其對多器官的影響。 1應(yīng)用5％?；悄懰徕c逆行胰膽管內(nèi)注射可誘發(fā)SD大鼠SAP模型，頸靜脈切開置管可建立SD大鼠補(bǔ)液通路。此模型穩(wěn)定、重復(fù)性好，并可實(shí)施靜脈補(bǔ)液用藥。 2SAP早期即可引起肺臟、肝臟、心臟、腎臟等器官損傷性病理

13、形態(tài)學(xué)變化及其功能障礙。 3SAP早期即可引起腸粘膜機(jī)械屏障損傷，導(dǎo)致內(nèi)毒素血癥及細(xì)菌移位，胰腺、肺臟、肝臟、腎臟及小腸系膜的細(xì)菌感染。 第二部分：SAP時(shí)β-END、ACTH、GC、GH、SS變化及烏司他丁、生長抑素早期干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究。 第三部分：SAP時(shí)淋巴細(xì)胞免疫功能變化及烏司他丁、丹參早期干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究。 1SAP早期表現(xiàn)為血清促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6明顯升高，而抗炎細(xì)胞因子I

14、L-2明顯降低、IL-10緩慢升高，從而導(dǎo)致機(jī)體促炎與抗炎細(xì)胞因子平衡的失調(diào)。 2SAP時(shí)胰腺組織細(xì)胞、血單個(gè)核細(xì)胞的TNF-α表達(dá)明顯增高，且前者又明顯高于后者，是SAP時(shí)TNF-α產(chǎn)生和分泌的重要來源。 3SAP時(shí)胰腺組織細(xì)胞、血單個(gè)核細(xì)胞的NF-κB表達(dá)明顯增高，且前者明顯高于后者，預(yù)示著NF-κB的活性增強(qiáng)，從而可引起炎癥細(xì)胞因子的大量產(chǎn)生和釋放，導(dǎo)致SIRS。 4SAP時(shí)胰腺組織細(xì)胞、血單個(gè)核細(xì)胞的IL

15、-2R、IL-6R表達(dá)明顯降低，預(yù)示著細(xì)胞膜上的IL-2R、IL-6R的數(shù)量減少和功能障礙，從而影響其與相應(yīng)配體結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。 5烏司他丁、思他寧均可明顯降低SAP時(shí)血清促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平，并使IL-10降低接近正常水平，明顯提高血清IL-2的水平，維持促炎與抗炎細(xì)胞因子的平衡，抑制免疫過激，以抑制或減輕SIRS。 6烏司他丁、思他寧可明顯降低SAP時(shí)胰腺組織細(xì)胞、血單個(gè)核細(xì)胞的NF

16、-κB、TNF-α的表達(dá)，從而抑制NF-κB的活性，減少TNF-α的合成和釋放，減輕或抑制炎癥細(xì)胞因子的“瀑布級(jí)聯(lián)反應(yīng)”。 7烏司他丁、思他寧可明顯降低SAP時(shí)胰腺組織細(xì)胞、血單個(gè)核細(xì)胞的IL-2R、IL-6R的表達(dá)，從而維護(hù)其結(jié)構(gòu)的完整和功能的正常。 第五部分：SAP時(shí)紅細(xì)胞免疫功能、氧自由基變化及烏司他丁、丹參早期干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究。 1SAP時(shí)RBC-C3bRR明顯降低，RBC-ICR明顯升高，表明SAP時(shí)紅細(xì)

17、胞結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生異常，免疫黏附功能降低，并導(dǎo)致紅細(xì)胞抗原識(shí)別、提呈及清除循環(huán)免疫復(fù)合物能力降低， 2SAP時(shí)RBC-SOD明顯降低，血清MDA明顯升高，表明SAP時(shí)氧自由基水平升高，且機(jī)體清除氧自由基能力降低與紅細(xì)胞SOD含量下降有關(guān)。 3SAP時(shí)RBC-C3bRR、RBC-SOD及血清MDA的檢測，可作為SAP紅細(xì)胞免疫功能狀態(tài)的判斷，以及SAP病程進(jìn)展及預(yù)后監(jiān)測的客觀指標(biāo)。 4應(yīng)用烏司他丁、丹參均可明顯提高S