高惡性膀胱移行細胞癌與相應正常上皮差異表達基因的克隆及功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該課題應用抑制消減雜交技術構建人膀胱移支細胞癌和正常膀胱上皮組織差異表達的cDNA消減文庫,進一步利用斑點印跡雜交(Dotblot)從中篩選出BTCC差異表達的基因,隨機選取部分克隆進行測序,結果在GenBank中作同源性對比分析.應用Notthern blot技術對所克隆的高拷貝新基因片段進行差異表達分析;對其中有明顯差異表達的膀胱癌特異的新基因片段應用SMART RACE技術進行全長克隆,應用免疫熒光原位雜交技術進行染色體定位,并初

2、步推斷所克隆的新基因全長序列的編碼區(qū)和蛋白結構.應用反義核酸技術阻斷該新基因在膀膠癌EJ細胞中的表達后,以觀察膀胱癌EJ細胞形態(tài)、生長、凋亡、死亡、轉移、增殖活性等的變化,通過以上研究來探討該新基因的功能.最后應用RT-PCR技術檢測新基因在不同分級、分期臨床膀膠癌標本中的表達及意義.該研究表明BQ135232是跟膀胱癌發(fā)生發(fā)展密切相關的新基因,它的表達與膀胱癌細胞的生長、增殖、抗凋亡密切相關.它的成功克隆為闡明膀胱癌發(fā)生發(fā)展的分子生物

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