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1、該課題應(yīng)用抑制消減雜交技術(shù)構(gòu)建人膀胱移支細胞癌和正常膀胱上皮組織差異表達的cDNA消減文庫,進一步利用斑點印跡雜交(Dotblot)從中篩選出BTCC差異表達的基因,隨機選取部分克隆進行測序,結(jié)果在GenBank中作同源性對比分析.應(yīng)用Notthern blot技術(shù)對所克隆的高拷貝新基因片段進行差異表達分析;對其中有明顯差異表達的膀胱癌特異的新基因片段應(yīng)用SMART RACE技術(shù)進行全長克隆,應(yīng)用免疫熒光原位雜交技術(shù)進行染色體定位,并初
2、步推斷所克隆的新基因全長序列的編碼區(qū)和蛋白結(jié)構(gòu).應(yīng)用反義核酸技術(shù)阻斷該新基因在膀膠癌EJ細胞中的表達后,以觀察膀胱癌EJ細胞形態(tài)、生長、凋亡、死亡、轉(zhuǎn)移、增殖活性等的變化,通過以上研究來探討該新基因的功能.最后應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測新基因在不同分級、分期臨床膀膠癌標(biāo)本中的表達及意義.該研究表明BQ135232是跟膀胱癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的新基因,它的表達與膀胱癌細胞的生長、增殖、抗凋亡密切相關(guān).它的成功克隆為闡明膀胱癌發(fā)生發(fā)展的分子生物
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