T-大顆粒淋巴細(xì)胞白血病臨床特點(diǎn)及療效IFN-γ在造血調(diào)節(jié)中的作用.pdf

1、第一部分
　　 目的：提高對(duì)T大顆粒淋巴細(xì)胞白血病(T LGLL)的認(rèn)識(shí)。
　　 方法：回顧性分析我院2000年2月~2009年11月間確診的59例T LGLL患者病例資料。
　　 結(jié)果：T LGLL起病潛隱、進(jìn)展緩慢，中位確診年齡50歲。貧血相關(guān)癥狀最為突出，40.7％患者脾臟輕中度腫大，13.6％患者肝臟輕度腫大。1例患者合并類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)中性粒細(xì)胞<<1.5x109/L者占66.1％<0.5

2、x109/L者占13.6％048例患者貧血，中位血紅蛋白65g/L，合并純紅細(xì)胞再生障礙性貧血(PRCA)都1例，占53.4％。外周血大顆粒淋巴細(xì)胞(LGL)絕對(duì)值中位數(shù)1.64x10911，大多數(shù)(62.0％)患者LGL數(shù).OX109/Lo48例(81.3％)患者LGL免疫表型為CD3+CD8+CD57+CD56'o48例患者接受治療，治療總有效率87.5％，完全血液學(xué)緩解(HCR)者占60.4％e33例患者接受環(huán)抱素為主的治療，有效

3、率為81.8％ HCR率60.6％。復(fù)發(fā)率35.7％，主要由藥物減量、停藥或感染所致。中位隨訪時(shí)間20個(gè)月((3.5-120月)。
　　 結(jié)論：T LGLL起病及進(jìn)展緩慢，主要表現(xiàn)血細(xì)胞減少和脾臟腫大，常合并PRCA。外周血LGL計(jì)數(shù)多<2.0X109/L，免疫表型以CD3+CD8+CD57+為主。治療有效率高，對(duì)以環(huán)抱素為主的免疫抑制治療方案反應(yīng)良好。
　　 第二部分
　　 目的:通過基因轉(zhuǎn)導(dǎo)研究小鼠IFN-γ

4、在造血調(diào)節(jié)中的作用。
　　 方法:從小鼠脾臟細(xì)胞中提取mRNA RT-PCR方法擴(kuò)增mIFN-γ片段，連接到pCDHI-MCSI-EF1-copGFP(pCDH-GFP)載體上，構(gòu)建小鼠IFN-y(mIFN-γ)慢病毒表達(dá)載體pCDH1-mIFN-γ-EF1-copGFP( pCDH-mIFN-γ-GFP)。通過磷酸鈣沉淀法轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，分別制備帶有pCDH-mIFN-γ-GFP和pCDH-GFP空載體的慢病毒，感染C57小

5、鼠的骨髓單個(gè)核細(xì)胞(BMMNC)，48小時(shí)后進(jìn)行甲基纖維素集落培養(yǎng)，觀察BMMNC集落形成能力，并將轉(zhuǎn)導(dǎo)后的BMMNC尾靜脈注射至致死劑量照射的受體C57小鼠體內(nèi)，定期尾靜脈取血檢查血象，并用流式細(xì)胞儀檢測外周血細(xì)胞GFP陽性率。另外，取小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)傳代，用慢病毒感染后經(jīng)尾靜脈注射至正常C57小鼠體內(nèi)，定期檢測血象。
　　 結(jié)果:用帶有pCDH-mIFN-γ-GFP或空載體pCDH的病毒感染293T細(xì)胞，檢測病毒滴度分別

6、為4.5 x1 OS/ml和3.4X l Os/ml。經(jīng)ELISA方法檢測上清液中mIFN-γ含量約為188pg/ml，證實(shí)感染的細(xì)胞中有mIFN-γ的表達(dá)。慢病毒感染后的C57小鼠BMMNG.集落培養(yǎng)結(jié)果顯示:感染mIFN-γ的BMMNC集落生成數(shù)量較空載體對(duì)照組顯著減少，提示轉(zhuǎn)導(dǎo)mIFN-γ可能直接損傷造血前體細(xì)胞，導(dǎo)致其集落形成能力下降。接受骨髓移植的C57小鼠2周后尾靜脈血象顯示:轉(zhuǎn)導(dǎo)mIFN-γ組的小鼠血象恢復(fù)較對(duì)照組晚，提示

7、mIFN-y可能通過損傷早期造血細(xì)胞導(dǎo)致造血恢復(fù)延遲。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示:移植后8周外周血中仍可見GFP陽性細(xì)胞，表明轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞在小鼠體內(nèi)可存活8周以上。移植了經(jīng)病毒感染的小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞后的小鼠，2周開始尾靜脈取血查血象，至血象出現(xiàn)下降時(shí)處死小鼠，取骨髓組織送病理檢查。該部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果較少，有待完善。
　　 綜上所述，本研究通過慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)mIFN-γ至小鼠BMMNC中，發(fā)現(xiàn)不僅造血細(xì)胞體外集落形成受抑制，而且移植小鼠骨髓造血