PPAR—γ在腦膜瘤中的基因和蛋白表達及曲格列酮對腦膜瘤細胞生長的作用的探討.pdf

1、腦膜瘤是顱內(nèi)高發(fā)的良性腫瘤，手術(shù)治療是主要的治療方法，但臨床上放射治療以及其他非手術(shù)治療也是重要的輔助手段，因此探討腦膜瘤新的治療靶點也是目前研究熱點之一。PPAR—γ是一種細胞核轉(zhuǎn)錄因子，與糖代謝調(diào)節(jié)、脂肪細胞分化相關(guān)。其配體除了具有改善胰島素抵抗和血脂、免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用外，還具有抗腫瘤細胞增殖和促細胞分化作用，對腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移、侵襲等生物學(xué)行為也有影響。PPAR—γ及其激活劑曲格列酮在腦膜瘤中的研究少有報道，本課題擬通過RT—PC

2、R、免疫組化以及體外實驗探討PPAR—γ在腦膜瘤中的表達及其激活劑曲格列酮對細胞生長的影響。本課題共分為兩個部分： Ⅰ PPAR—γ在腦膜瘤中的基因和蛋白表達研究 目的：探討PPAR—γ在腦膜瘤中的基因和蛋白表達，并探討其表達與腦膜瘤增殖指標(biāo)的關(guān)系。 方法：應(yīng)用RT—PCR、免疫組化的方法對48例腦膜瘤的手術(shù)標(biāo)本進行研究：應(yīng)用異硫氰酸胍法提取總RNA；逆轉(zhuǎn)錄獲取cDNA，進行PCR反應(yīng)并瓊脂糖凝膠電泳后，凝膠成像

3、系統(tǒng)定量分析。按SP免疫組化染色方法檢測PPAR—γ的表達，并以增殖細胞抗原為指標(biāo)檢測增殖情況，采用雙盲法觀察其結(jié)果。 結(jié)果：非典型性組（x=0.465±0.375）明顯高于良性組（x=0.766±0.481，t=7.56，P<0.01）；女性表達略高于男性（t=5.68，P<0.05）。免疫組化結(jié)果顯示所有標(biāo)本均有PPAR—γ表達，與良性組相比，非典型性組PPAR—γ蛋白表達較強（P<0.05），PPAR—γ蛋白表達與腦膜瘤患

4、者的年齡、性別均無明顯相關(guān)（P>0.05）。 結(jié)論：非典型腦膜瘤組PPAR—γ表達高于良性組，其表達與增殖活性成正相關(guān)。 Ⅱ曲格列酮對腦膜瘤細胞的體外實驗 目的：探討PPAR—γ激活劑曲格列酮在腦膜瘤細胞中可能的抗腫瘤作用。 方法：選取人腦膜瘤細胞16例（Ⅰ級，良性，10例；Ⅱ級，非典型性，6例）進行，應(yīng)用MTT方法檢測曲格列酮對腦膜瘤細胞生長的作用，應(yīng)用流式細胞儀檢測曲格列酮干預(yù)后腫瘤細胞凋亡情況。

5、 結(jié)果：MTT實驗顯示試驗組OD值均明顯低于正常對照組，曲格列酮促進細胞凋亡（或死亡）與濃度有密切關(guān)系，即藥物濃度越大，其OD值越小。濃度為1μmol/L的曲格列酮對體外培養(yǎng)的腦膜瘤細胞生長無明顯影響；濃度為10或50μmol/L時的曲格列酮作用24小時后OD值低于對照組（P<0.05），72小時抑制最明顯（P<0.01），120小時以后抑制作用減弱。FCM檢測結(jié)果表明，腦膜瘤細胞經(jīng)不同濃度的曲格列酮作用24h、48h、72h、12

6、0h的凋亡率的實驗結(jié)果表明實驗組與對照組之間及不同濃度組之間，有顯著性差異（P<0.05）；各時間組與對照組之間及不同時間組之間也有顯著性差異（P<0.05）。分析顯示曲格列酮作用腦膜瘤細胞后，可明顯誘導(dǎo)細胞凋亡，且隨作用濃度和作用時間的延長，凋亡率顯著增加；但在50、100μmol/L作用72h后，死亡細胞亦明顯增加。 結(jié)論：濃度為10或50μmol/L時的曲格列酮作用24小時不但可以抑制腦膜瘤細胞生長而且可以誘導(dǎo)凋亡，72小