UCMSCs經(jīng)枕大池移植治療發(fā)育鼠HIE后遺癥實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究分為兩部分。
　　 第一部分：新生鼠宮內(nèi)缺氧缺血性腦病模型的建立與評(píng)價(jià)。
　　 目的：探討宮內(nèi)缺氧缺血性腦病模型的制作及評(píng)價(jià)方法。
　　 方法：選用孕20天SD孕鼠，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（n=12）和對(duì)照組（n=3）。實(shí)驗(yàn)組結(jié)扎孕鼠子宮動(dòng)脈15分鐘，自然分娩，所生小鼠為宮內(nèi)全腦缺氧缺血損傷模型組小鼠；對(duì)照組為正常組孕鼠所生小鼠。記錄各組實(shí)驗(yàn)小鼠數(shù)目，計(jì)算死亡率。監(jiān)測(cè)D1~D16體重，觀察睜眼、耳廓展開(kāi)時(shí)間，用神經(jīng)

2、反射測(cè)試、懸吊實(shí)驗(yàn)、礦場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、拒俘反應(yīng)試驗(yàn)、轉(zhuǎn)棒儀實(shí)驗(yàn)及Morris水迷宮等對(duì)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組進(jìn)行運(yùn)動(dòng)功能與認(rèn)知功能評(píng)價(jià)。隨機(jī)取初生幼鼠做病理切片觀察。
　　 結(jié)果：模型組胎鼠總數(shù)163只，死產(chǎn)率47.2％，1周內(nèi)死亡率6.9％。實(shí)驗(yàn)組體重增長(zhǎng)較對(duì)照組緩慢，睜眼和耳廓展開(kāi)時(shí)間較對(duì)照組延遲。部分神經(jīng)反射較對(duì)照組出現(xiàn)延遲；懸吊實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M懸吊時(shí)間明顯較對(duì)照組短（P＜0.05）；轉(zhuǎn)棒儀實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M停留時(shí)間明顯較對(duì)照組短（P＜0.05）；曠場(chǎng)

3、實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M小鼠穿格次數(shù)及糞便粒數(shù)明顯較對(duì)照組少（P＜0.05），而站立次數(shù)與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異；拒俘反應(yīng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M小鼠較對(duì)照組難以抓??；Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)組小鼠獲取隱藏平臺(tái)位置時(shí)間較對(duì)照組明顯延長(zhǎng)，在目的象限停留時(shí)間比對(duì)照組短。HE染色光鏡觀察，模型組大腦皮層及海馬區(qū)有炎性細(xì)胞聚集，神經(jīng)元細(xì)胞明顯減少，神經(jīng)元細(xì)胞變性壞死，膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性增生。
　　 結(jié)論：結(jié)扎孕鼠子宮動(dòng)脈制備宮內(nèi)缺氧缺血?jiǎng)游锬Ｐ涂梢猿晒δ７氯祟怘I

4、E模型。
　　
　　 第二部分：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療有效性研究。
　　 目的：探索臍帶源性間充質(zhì)干細(xì)胞（UCMSCs）移植治療發(fā)育鼠缺氧缺血性腦?。℉IE）后遺癥的有效性。
　　 方法：人臍帶組織經(jīng)膠原酶和胰蛋白酶消化后，分離、培養(yǎng)得到UCMSCs，DII標(biāo)記，制備并標(biāo)記UCMSCs。取子宮動(dòng)脈結(jié)扎制備的全腦缺血缺氧模型出生20天（D20）小鼠為實(shí)驗(yàn)組，隨機(jī)分為干細(xì)胞組（n=39）和PBS組（n=3

5、9）；干細(xì)胞組經(jīng)枕大池穿刺注射DII標(biāo)記之UCMSCs，PBS組經(jīng)枕大池穿刺注射PBS液。于移植后1、6周，采用免疫組化方法檢測(cè)DII、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、巢蛋白（Nestin）、膠原纖維酸性蛋白（GFAP）。用懸吊實(shí)驗(yàn)、轉(zhuǎn)棒儀實(shí)驗(yàn)及Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行行為學(xué)評(píng)估，記錄各項(xiàng)評(píng)分。正常組孕鼠自然分娩，所生小鼠為對(duì)照組，與實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行同期對(duì)照。并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　 結(jié)果：干細(xì)胞移植后1周、6周發(fā)現(xiàn)海馬區(qū)及皮質(zhì)運(yùn)動(dòng)

6、區(qū)出現(xiàn)DII、NSE、Nestin和GFAP陽(yáng)性細(xì)胞。懸吊實(shí)驗(yàn)，移植后2周干細(xì)胞組較PBS組、對(duì)照組懸吊持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，三者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。轉(zhuǎn)棒儀實(shí)驗(yàn)，移植后3周干細(xì)胞組較PBS組、對(duì)照組在轉(zhuǎn)棒儀上停留時(shí)間長(zhǎng)，三者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，干細(xì)胞組、PBS組、對(duì)照組的平均潛伏期差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），不同時(shí)間平均潛伏期差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），組別與時(shí)間之間無(wú)明顯的交互

7、作用（p=0.0939）。空間探索實(shí)驗(yàn)單因素方差分析結(jié)果顯示，60s內(nèi)干細(xì)胞組、PBS組、對(duì)照組在目標(biāo)象限（3象限）游泳時(shí)間，三者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。干細(xì)胞組、PBS組、對(duì)照組第一次穿過(guò)平臺(tái)所在位置的時(shí)間，三者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)枕大池移植至缺氧缺血性腦損傷大鼠模型后，可遷移至海馬區(qū)與皮質(zhì)運(yùn)動(dòng)區(qū)，并分化為神經(jīng)干細(xì)胞、神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細(xì)胞；外源性干細(xì)胞移植在一定程度上能促進(jìn)腦功