瑣瑣葡萄提取物對小鼠巨噬細胞細胞因子及Toll樣受體表達的影響.pdf

1、目的：分別利用LPS、Poly(I:C)模擬外源性細菌、病毒感染，探討瑣瑣葡萄提取物多糖(VTP)、黃酮(VTF)和水提原液(VTY)對RAW264.7細胞分泌TNF-α，IFN-β的影響及其對細胞表面TLR4、TLR3基因表達的影響。方法：通過對RAW264.7型細胞生物學形態(tài)的觀察，生長曲線的繪制掌握其一般生物學活性；分別用6.25、12.5、25、50、100、200、400 μg/ml的VTP、VTF和VTY, 0.01、0.1

2、、1、10 μg/ml的LPS，10、25、50、100 μg/ml的Poly(I:C)作用于RAW264.7細胞，48 h后采用MTT法測定各組細胞的OD值并計算VTP、VTF和VTY的TC50；采用ELISA法測定LPS和Poly(I:C)最適刺激濃度和VTP、VTF和VTY干預其分泌細胞因子的最適干預濃度；采用反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測TLR3、TLR4基因表達情況。結果：(1)瑣瑣葡萄提取物VTP、VTF和VTY對

3、RAW264.7細胞的TC50分別為599.501、1354.285和1546.094 μg/ml；(2)10 μg/ml，24 h作為LPS最適刺激條件誘導炎癥；與LPS模型組比較VTF及VTY所有劑量組對TNF-α炎癥因子的抑制有統(tǒng)計學差異（P<0.01)，而VTP(6.25、12.5、50μg/ml)組和25μg/ml劑量組對TNF-α炎癥因子的增加有統(tǒng)計學意義（P<0.01，P<0.05)；(3)以100 μg/ml 刺激24

4、h作為Poly(I:C)誘導RAW264.7細胞產(chǎn)生IFN-β的最適條件；與Poly(I:C)模型組相比，VTF(6.25、12.5、25μg/ml)和VTY所有劑量組對IFN-β的抑制均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；而VTP(6.25、12.5、50μg/ml)組對IFN-β的增加有統(tǒng)計學意義（P<0.01)(4)與細胞對照組比較，不同處理組TLR3和TLR4基因表達的上調均具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；與LPS刺激組相比，VTF干