豚鼠肺臟上皮細胞形成及Toll樣受體(TLR)信號因子的發(fā)育表達.pdf

1、豚鼠是研究人哮喘病、結(jié)核病等呼吸道疾病的理想動物模型之一。同時，豚鼠也是研究肺臟的先天免疫機制和呼吸道疾病的致病機理的常用模型。因此，本研究對豚鼠肺臟發(fā)育過程中上皮細胞的發(fā)育及其Toll樣受體(TLRs)信號表達進行了初步的研究。
　　 本研究利用組織化學染色(HE)和免疫組織化學(IHC)染色方法對不同發(fā)育時期豚鼠呼吸道主要上皮細胞的類型與組成進行了形態(tài)學觀察，并對TLRs信號分子的發(fā)育表達利用定量反轉(zhuǎn)錄PCR(qRT-PCR

2、)和免疫印跡(WB)法進行了分析。結(jié)果顯示，在胚胎(Embryonic)發(fā)育到45d和52d時，豚鼠肺臟分別處于假腺期和小管期;在胚胎發(fā)育到59d至出生前，肺臟呈現(xiàn)為肺泡增多的囊狀期;在出生后7d至成年期（3個月），豚鼠肺臟發(fā)育處于肺泡期。IHC結(jié)果表明，在胚胎發(fā)育的第45d，肺臟存在具有多能性的基底細胞和肺泡Ⅱ型細胞，當胚胎發(fā)育到52d時，即肺臟發(fā)育的小管期，可以觀察到纖毛細胞和Clara細胞。熒光定量PCR分析結(jié)果表明，在出生后3個

3、月（成年）、28d、14d、7d和0d，以及胚胎期E45d、E52d和E59d的不同發(fā)育階段，豚鼠肺臟中TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、MyD88和TRAF6，這11種TLR相關(guān)信號均有表達，但在出生前，各因子的表達量相對高于出生后。其中，在胚胎期E45d、E52d和E59d的豚鼠肺臟組織中，TLR1-10總體的表達水平為顯著遞增趨勢，E52d時，TLR4表達量最高，E45d表

4、達量次之;在E52d和E59d時，TRAF6和MyD88相對表達量最高;而在出生后到成年（3個月）期，各因子的表達量顯著降低，且出生后的不同時期，同一因子間的表達差異不顯著。同時，利用蛋白免疫印跡WesternBlotting技術(shù)在蛋白質(zhì)水平進一步對上述因子的表達進行了驗證。上述結(jié)果表明，豚鼠肺臟在發(fā)育過程中，隨著上皮細胞的增殖和分化，肺臟在形態(tài)學和功能上趨于成熟。TLRs在出生前的增高現(xiàn)象在分子水平提示豚鼠肺臟出生前的形態(tài)功能成熟性，