Wnt-β-catenin信號在BCG誘導(dǎo)肺臟上皮細(xì)胞凋亡中的調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)是引起肺臟結(jié)核(Tuberculosis)的一種通過空氣傳播的傳染性病原菌，在全球范圍內(nèi)由其感染引發(fā)的傳染性死亡人數(shù)僅次于艾滋病?，F(xiàn)今結(jié)核分枝桿菌在全球范圍內(nèi)的傳播主要面對兩大問題:1、結(jié)核分枝桿菌與艾滋病共感染，成倍造成對人類健康更嚴(yán)重的威脅;2、多重耐藥性結(jié)核分枝桿菌病例數(shù)量增長影響治療。固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答為機(jī)體對結(jié)核分枝桿菌免疫的兩種基本過程，以往研

2、究中認(rèn)為巨噬細(xì)胞在對抗結(jié)核分枝桿菌的過程中行使主要作用，但現(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)肺泡上皮細(xì)胞同樣是重要的、能夠行使免疫功能的細(xì)胞。Wnt信號通路是一條保守的信號通路，在細(xì)胞的增殖、分化、遷移和凋亡等多種過程中起作用，同時是機(jī)體發(fā)育調(diào)控也是免疫調(diào)控過程中的調(diào)控信號之一。細(xì)胞被結(jié)核分枝桿菌感染后通常會產(chǎn)生三種狀態(tài):凋亡、壞死和存活。凋亡和壞死作為兩種可觀察到死亡方式可以導(dǎo)致不同的結(jié)果:細(xì)菌引起的壞死有助于其逃離巨噬細(xì)胞和宿主免疫抵抗并傳播。凋亡使細(xì)胞保

3、持完整的膜結(jié)構(gòu)而死，可以減少病原菌的存活率。越來越多的證據(jù)表明Wnt信號通過多種途徑影響細(xì)胞凋亡，其中Wnt/β-catenin信號和非Wnt/β-catenin信號都能夠影響細(xì)脆凋亡。本項(xiàng)目使用牛分枝桿菌卡介苗(BCG)感染人類肺泡上皮Ⅱ型細(xì)胞A549細(xì)胞系并通過抑制或激活Wnt/β-catenin信號來探究Wnt信號與病原微生物引發(fā)的細(xì)胞凋亡發(fā)生過程之間的關(guān)系以及具體作用機(jī)制，旨在探究肺臟上皮細(xì)胞中Wnt信號與凋亡信號之間的調(diào)控關(guān)系

4、。另可以對病原微生物引發(fā)的細(xì)胞凋亡調(diào)控機(jī)制研究提供一定的依據(jù)，此外還能對結(jié)核分枝桿菌診斷與治療的發(fā)展有所啟發(fā)。
　　通過本項(xiàng)目的研究，在除去驗(yàn)證了課題組在過去得出的BCG對Wnt/β-catenin信號起到抑制炎癥反應(yīng)作用以外，通過流式細(xì)胞技術(shù)和蛋白免疫雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)Wnt/β-catenin信號可以調(diào)控BCG引起的cyclinD1和c-myc的表達(dá)量變化，降低細(xì)胞由BCG引起的凋亡率和ROS的產(chǎn)生。但在使用抑制劑的情況下Wnt/β

5、-catenin信號通路對BCG引起的細(xì)胞凋亡起促進(jìn)作用。后對凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)和促凋亡蛋白BAX的檢測中發(fā)現(xiàn)兩種蛋白的表達(dá)量變化符合Wnt/β-catenin信號通路的調(diào)控規(guī)律，并且在使用了Wnt/β-catenin信號通路抑制劑XAV939以及廣譜caspase抑制劑Z-vad處理實(shí)驗(yàn)組之后兩種蛋白的表達(dá)情況依然符合Wnt/β-catenin信號通路的調(diào)控規(guī)律，同時自始至終并未觀察到caspase3蛋白的表達(dá)情況有符合規(guī)律的跡象

6、。故本實(shí)驗(yàn)共得到三個主要結(jié)果，即，在本實(shí)驗(yàn)條件下:1、Wnt/β-catenin信號對BCG引起的A549細(xì)胞的凋亡表現(xiàn)為雙向調(diào)控。2、Wnt/β-catenin信號對BCG引起的細(xì)胞凋亡的調(diào)控不依賴caspase3、Wnt/β-catenin信號通過凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)-Bcl2相關(guān)蛋白X(BAX)通路來對BCG引起的凋亡進(jìn)行抑制。此外還通過實(shí)驗(yàn)中呈現(xiàn)的規(guī)律大膽推斷，在本實(shí)驗(yàn)條件下:1、在細(xì)胞穩(wěn)定自身活性氧水平的過程中有可能存在AI