西格列汀對(duì)高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞Wnt-β-catenin信號(hào)途徑及轉(zhuǎn)分化影響的研究.pdf

1、目的：
　　探討Wnt/β-catenin信號(hào)途徑在高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用及西格列汀的干預(yù)作用。
　　方法：
　　取大鼠腎近端小管的上皮細(xì)胞（NRK-52E），取用低糖DMEM+10％胎牛血清培養(yǎng)基，在37℃，5%CO2條件下生長(zhǎng)，等待細(xì)胞長(zhǎng)到大約80%融合時(shí)，換到無(wú)胎牛血清的培養(yǎng)基培育24小時(shí)，讓細(xì)胞能夠同步生長(zhǎng)，之后把這些細(xì)胞分組如下：
　　(1)正常對(duì)照組：葡萄糖5.5mmol/L；

2、　?。?）高糖組：葡萄糖25mmol/L；
　?。?）高滲組：甘露醇19.5mmol/L+葡萄糖5.5mmol/L；
　?。?）西格列汀干預(yù)組：西格列汀10umol/L+葡萄糖25mmol/L；
　?。?）XAV939組，用Wnt/β-catenin通路抑制劑XAV939(1umol/L)預(yù)處理細(xì)胞40min，然后加入25mmol/L的葡萄糖；48h后聚齊各組細(xì)胞，用Western blot法測(cè)驗(yàn)Wnt4、β-cate

3、nin、α-SMA蛋白表達(dá)的程度。用Real time-PCR法檢測(cè)Wnt4、β-catenin、α-SMA等基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：隨著西格列汀濃度的上升，細(xì)胞凋亡率也逐步升高。依照試驗(yàn)結(jié)果和有關(guān)參考文獻(xiàn)，此次實(shí)驗(yàn)中采用10umol/l的西格列汀濃度。
　　2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果：48小時(shí)后，高滲組腎小管上皮細(xì)胞中Wnt4、β-catenin、α-SMA的mRNA表達(dá)程度和正常對(duì)照組并無(wú)明

4、顯差別（P＞0.05）；高糖組腎小管上皮細(xì)胞中Wn4t、β-catenin、α-SMA的mRNA表達(dá)水平與其他組相比有明顯增加，差別存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；西格列汀組與Wnt阻斷劑組腎小管上皮細(xì)胞中Wnt4、β-catenin、α-SMA的mRNA表達(dá)程度相比高糖組明顯降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），當(dāng)中Wnt阻斷劑組降低更為明顯。
　　3.Western blot組：48小時(shí)之后，高滲組腎小管上皮細(xì)胞中Wnt4、

5、β-catenin、α-SMA的表達(dá)與正常對(duì)照組并無(wú)顯著差別（P＞0.05）；高糖組腎小管上皮細(xì)胞中Wnt4、β-catenin、α-SMA的表達(dá)和其他組對(duì)比有顯著增長(zhǎng)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；西格列汀組與Wnt阻斷劑組腎小管上皮細(xì)胞中Wnt4、β-catenin、α-SMA的表達(dá)比高糖組明顯降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），當(dāng)中Wnt阻斷劑組降低要更為明顯。
　　結(jié)論：
　　西格列汀可以通過(guò)部分抑制Wnt/